水通道蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

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1、新疆医科大学医学硕士学位论文进行电泳约90min，转印到PVDF膜上（300mA，90min），5%脱脂奶粉BSA-TBST4度封闭过夜，加入鼠抗人多克隆anti-AQP1抗体（1∶500稀释），室温孵育120min，然后加入HRP标记的山羊抗鼠IgG（1∶1000稀释），室温孵育120min，TBST洗涤3次，每次10min，3，3′-二氨基联苯胺（DAB）显色。染色条带被扫描后应用图像分析系统测定灰度值，计算每组患者的灰度值，比较两组的差别。3统计学处理将所有资料采用excel软件建立数据库。实验数据输入SPSS17.0软件数据库中，由于本实验结果服从正态分布，因此我们首先经方

2、差齐性检验，如方差齐则采用两独立样本均数比较的t检验，如方差不齐可选用秩和检验，检验水准a=0.05，P＜0.05代表有统计学意义。6新疆医科大学医学硕士学位论文结果1免疫组织化学法所有切片染色背景清晰，阴性对照不着色。AQP1阳性反应呈棕黄色，主要表达于膀胱黏膜微血管和小动脉的内皮细胞及肿瘤细胞。对照组：AQP1主要表达在正常膀胱黏膜微血管和小动脉的内皮细胞的胞浆和胞膜（图1）。膀胱尿路上皮癌组：AQP1主要表达于肿瘤微血管内皮细胞、肿瘤细胞胞浆内和胞膜上（图2）。图1AQP1在正常膀胱组织中的表达图2AQP1在膀胱尿路上皮癌组织中的表达（400×）（400×）AQP2阳性反应呈

3、棕黄色，主要存在正常膀胱组织（图3）及膀胱尿路上皮癌组织（图4）的细胞间质中。图3AQP2在正常膀胱组织中的表达图4AQP2在膀胱尿路上皮癌组织中的表达（400×）（400×）7新疆医科大学医学硕士学位论文AQP3阳性反应呈棕黄色，均表达于膀胱尿路上皮癌及正常膀胱组织粘膜上皮细胞的胞质及胞膜。两者表达位置未见明显差别。对照组：AQP3主要表达在正常组织粘膜上皮细胞的胞质及胞膜，阴性对照未见着色（图5）。膀胱尿路上皮癌组：AQP3主要定位于膀胱尿路上皮癌组织粘膜上皮细胞的胞质及胞膜（图6）。对原始数据输入SPSS17.0软件数据库中行方差齐性检查，确定方差齐后用两独立样本均数比较t检

4、验分析：AQP1在膀胱尿路上皮癌组织中表达量较正常膀胱组织明显增多，差异有统计学意义（P＜0.01）。AQP2膀胱尿路上皮癌组织及正常膀胱组织中表达强度基本相同，二者之间差异无统计学意义（P＞0.05）。AQP3在膀胱尿路上皮癌组织中表达量较正常膀胱组织明显增多，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。图5AQP3在正常膀胱组织中的表达图6AQP3在膀胱尿路上皮癌组织中的表达（400×）（400×）表2免疫组织化学法两组患者AQP1-3表达量的差别（n=25,x±s）分组AQP1AQP2AQP3膀胱尿路上皮癌组3.9167±1.74252.7917±1.10253.2400±1.

5、2342对照组2.5833±1.38052.5000±1.35132.3200±1.4922P＜0.01＞0.05＜0.052免疫印迹法膀胱尿路上皮癌组织中及正常膀胱组织中均有ß-actin蛋白表达，蛋白条带位置为42kD，表达量基本相同。AQP1、AQP2和AQP3在膀胱尿路上皮癌组织中及正常膀胱组织中均有表达。经免疫印记发发现：AQP1蛋白条带位置为28kD，AQP2蛋白条带位置为30kD，AQP3蛋白条带位置为29kD（图7）。蛋白条带灰度值分析后，对原始数据行方差齐性检查，确定方差齐后采用两独立样本均数比较t检验分析表明：AQP1在膀胱尿路上皮癌中的表达量较正常膀胱组织中增

6、多，二者之间差异有统计学意义（P＜0.05）。AQP2表达量在膀胱尿路上皮癌8新疆医科大学医学硕士学位论文组织中及正常膀胱组织中并无明显差别，二者之间差异无统计学意义（P＞0.05）。AQP3在膀胱尿路上皮癌中的表达量较正常膀胱组织中增多，二者之间差异有统计学意义（P＜0.05）。（表3）NCNCNCAQP1（28KD）AQP2（30KD）AQP3（29KD）ß-actin（43KD）图7N为正常膀胱组织C为膀胱尿路上皮癌组织表3免疫印迹法学法两组患者AQP1-3表达量的差别（n=25,x±s）分组AQP1AQP2AQP3膀胱尿路上皮癌组2.3826±0.85072.5305±1

7、.04372.2763±0.3668对照组1.6233±0.42932.2405±1.29061.3444±0.8460P＜0.05＞0.05＜0.059新疆医科大学医学硕士学位论文讨论膀胱癌是泌尿外科临床上最为常见的肿瘤之一，膀胱癌的发生和发展都是复杂的、多因素的病变变化过程，既有内在的遗传因素，又有外在的环境等危险因素。主要危险因素包括：性别、年龄（年龄越大，危险系数越高）、种族、在尿液中发现致癌物质、膀胱粘膜的慢性炎症、吸烟、职业暴露和药物（非那西丁和环磷酰胺）