天花粉蛋白对荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究.doc

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1、天花粉蛋白对荷瘤小藏抑瘤作用的实验研究作者：张艳琼，黄利鸣，吴江锋【摘要】目的通过建立荷U14小鼠宫颈癌模型，从个体水平初步探索天花粉蛋白对荷瘤小鼠体内抗肿瘤活性。方法建立荷U14小鼠宫颈癌模型，TCS治疗，检测抑瘤率、脾指数、流式细胞术分析T细胞亚群。结果TCS治疗组，脾指数明显高于阴性对照组，C较阴性对照组、CTX组明显减少；与正常组比较无显著性差异。TCS组的C/C较阴性对照组、正常组明显增大；与CTX组比较无显著性差异。结论在体内，当TCS的剂量为mg/kg时，具有一定的免疫调节和增强体液免疫功能作用。【关键词】天花粉蛋白荷瘤鼠抑瘤作用Abstract:ObjectiveTost

2、udytheanti-tumoreffectoftrichosaninguptheanimalmodetheTcellswasanalyztoryrate,theindexoItsAftertreatmentwpleenwasincreasedoththenegativegroupouslycomparedwithtthin(TCS)inU14settlofU14,thesubsetofedbythetumorinhibifspleenandFCM.ResuithTCS,theindexofsbviouslycomparedwi,theCdecreasedobvihenegativean

3、dCTXgroups,buthadnosignicomparedwiththenorCSgroupwasincreasewiththenegativeanddnosiguificantdiffththeCTXTCScanreguficantdifferenceasmalgroup.TheC/CinTdobviouslycomparednormalgroups,buthaerenceascomparedwilateimmunityandincreasethehumoralimmunityinvivowhenitsdoseismg/kgKeywords:Trichosanthin；Micew

4、ithtumor；Effectoftumor-inhibition人子宫颈癌是导致妇女死亡的一种常见恶性肿瘤。天花粉蛋白；环磷酰胺购自江苏恒瑞医药股份有限公司；RPMI-1640培养基购自Gibcol公司；PE标记C抗体购自eBioscience公司；FITC标记C抗体购自eBioscience公司；倒置显微镱和多功能显微镜及图像分析系统购自德国LEIca公司EPICSXL-4型流式细胞仪购自Beckmancoulter公司。U14肿瘤细胞株由三峡大学医学院免疫重点实验室提供。动物6〜8周龄近交系83比八小鼠32只，体质量18〜20g,雌性，购自武汉大学实验动物中心。2方法TCS对实体瘤

5、的抑制作用复苏U14细胞株，昆明小鼠腹腔中反复传代，第3代后5〜7d，取小鼠腹水，用无菌生理盐水调整细胞浓度为2X107/ml。常规消毒后，取ml细胞悬液接种于Balb/c小鼠右侧腋窝皮下。接种后的小鼠随机分3组：TCS实验组、阴性和阳性对照组，每组8只。TCS实验组：用生理盐水稀释TCS注射液，药物浓度为mg/kg,ml/只，给药1次/d，连续给药10次。阳性对照组：环磷酰胺，3Omg/kgo阴性对照组给予等体积的生理盐水。另设正常组8只，不进行任何处理。组织取材和称重第11天称小鼠体质量。眼球取血，置于加有抗凝剂的试管内。处死小鼠，取出肿瘤组织、脾脏，称瘤重、脾重，计算抑瘤率(inh

6、ibitionrate,IR)o计算脾指数，公式为：脾指数(SI)=脾脏重量(S)/体质量(W)(g/g)o流式细胞术分析T细胞亚群将血液中分别加入PE标记的C、FITC标记的C单克隆抗体各20p1，混匀，于室温下避光作用15〜30min。每个试管内加入溶血剂2ml,颠倒混匀后放暗处10min,离心，用PBS洗1次，加1%甲醛PBS液ml,固定10〜30min，经流式细胞仪检测每管中C，C细胞百分比。统计学处理实验数据以±3表示，采用软件进行分析。3结果小鼠一般情况的观察小鼠皮下接种U14瘤细胞5d内外观无明显的变化，活泼，大小便、饮食正常；接种癌细胞5〜7d后可触及皮下肿块，成瘤率10

7、0%，生理盐水组后期肿瘤生长迅速。TCS对荷瘤小鼠体质量、脾重和瘤重的影响结果见表1。表1荷瘤小鼠的体质量、脾指数、瘤重和抑瘤率流式细胞仪检测T细胞亚群的结果实验结果表明：①阳性对照组的C较其它各组均明显增高，差异有显著性；阴性对照组的C较其它组均明显减少，与TCS组有差别，与正常对照组比较统计学上无差异；②TCS组的C较阴性对照组、阳性对照组明显减少；与正常组比较无显著性差异；③TCS组的C/C较阴性对照组、正常组明显增大；与阳性