蚯蚓抗菌肽的提取及其活性检测毕业论文

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1、［蚓抗菌肽的提取及其活性检测摘要：采用不同的硫酸铵溶液沉淀蚯蚓粗蛋白，来探究硫酸铵浓度对蚯蚓蛋白质抗菌活性的影响；用不同pH的磷酸缓冲液处理蚯蚓粗蛋白沉淀来探究pH对其活性的影响；以及采用稀释法测量蚯蚓抗菌肽达到抑菌效果的最高稀释度。研究表明，80%硫酸铵沉淀的蚯蚓粗蛋白提取液的抑菌效果最好,•pH为中性及近中性更易于蚯蚓抗菌肽保持其活性；蚯蚓抗菌肽对G+的抑菌效果比对G"的好。关键词：蚯蚓;抗菌肽;硫酸铵沉淀;抗菌活性Abstract：inordertoexploretheeffectofthedifferentconcentrationsofammoniumsulfateonthea

2、ntibacterialactivityofEarthwormsprotein.sotheywereextractedbydifferentsaturationdegreeofammoniumsulfate.AndwecanexplorecrudeproteinsantimicrobialpeptideactivityofearthwormwithabufferphosphoricacidsolutionofdifferentpH,andmeasurethehighestdilutionofantimicrobialpeptidesofearthwormtoinhibitthegrowt

3、hofbacterialusingdilution.Studieshaveshownthatearthwormscrudeproteinextractedbuythe80%ammoniumsulfateprecipitationhasthebestinhibitoryeffect,neutralornearlyneutralpHisbetterfortheactivityoftheearthwormsantimicrobialpeptides,anditsinhibitoryeffecttoG*isbetterthanG".Keywords:earthworm;antibacterial

4、peptides;precipitatinginammoniumsulfate;antibacterialactivity0引言蚯蚓是营腐生生活动物，以腐败的食机物为食，生活充满了大量微生物的潮湿环境屮却极少符•病，这得益于蚯蚓体内独特的抗菌免疫系统［1］。其屮体液免疫很发达，这得益于抗傳肽在其巾发挥的重要作用。抗蘭肽(Anti-bacterialpeptides)是一类对抗外源性病原体致病作用的防御性肽类活性物质，是在诱导的条件下动物免疫防御系统产生的，也是动物免疫防御系统的重要组成部分［2］。随着对抗茼肽研究的深入，人们发现抗茼肽在动楨物和微生物中广泛分布，这些小分子量的多肽抗菌谱广

5、，还可以抗真菌，抗病毒，抗肿瘤，且不易产生抗药性[3]O国外最早的对蚯蚓抗菌肽的研究是从1985年开始的，Vaillier等人通过国凝胶过滤、色谱聚焦、抑菌活性测定，从蚯蚓的体腔液中提取出了3种活性蛋白，它们均表现出较强的抗菌作用，并且具宥红细胞凝聚和溶血的性质，分子量分别为20000Da,40000Da,45000Da,等电点分别为4.9,5.75,6.0[4]。国内直到1995年才有对于蚯蚓抗菌肽的研究报道。林少琴等[5]将蚯蚓粗提取物用DEAE-SepharoseFF层析柱分离纯化得到3种蛋白，并且通过对各组分进行的抗肿瘤研究，发现其对H22腹水瘤的抑制作用较明显。目前，在两栖类动

6、物、昆虫、哺乳动物和甲壳类动物中都可以分离出抗菌肽，在鱼类和线虫中也宥一些发现。但与其他动物相比蚯蚓来源广，便于养殖，易于处理，为蚯蚓抗菌肽的广泛使用提供了条件。而且蚯蚓抗菌肽主要存在于体腔液中，含量相对较高。W此利用蚯蚓抗菌肽易于诱导的特性，进行蚯蚓抗菌肽的直接提取利用，例如其作为抗生素饲料添加剂代替品，可以宥效地防止病原微生物的侵袭，减少药物的耐受性以及药物在人体和动物体残®的M题。因此蚯蚓抗菌肽的研究不仅可行性强，而且具有广阔的前景。1材料与方法1•1材料蚯蚓：野生蚯蚓；菌种：圣女果洗脱液屮分离的菌种试剂：浓度为50%,60%,70%,80%的饱和硫酸铵溶液PBS缓冲液：每升Nac

7、l8g;Kcl0.2g；Na2HPO41.44g；KH2PO40.24g,pH=4.5,6.0，7.5，9.0，4°C预冷LB固体培养基:每升胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，Nacl10g，琼脂粉15g,pH=7.4LB液体培养基：每升腆蛋白脉10g，酵母提取物5g，Nacl，10g，pH=7.4器材：小烧杯，大烧杯，玻璃棒，剪刀，组织匀浆机，离心管，低温离心机，滴管，电子天平，电磁炉，量简，容量瓶，锥形瓶，pH试纸，洒精灯，培养皿