何首乌饮对雌性衰老大鼠下丘脑神经递质的影响

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1、何首乌饮对雌性衰老大鼠下丘脑神经递质的影响作者：李亚丽，张娜，庞晓静，高福禄，王方娜，齐晅，陈雪【摘要】目的探讨下丘脑衰老时神经递质的变化及何首乌饮延缓下丘脑衰老的作用机制。方法D-半乳糖连续腹腔注射致亚急性衰老动物模型，造模后灌胃何首乌饮连续60d后，大鼠断头取下丘脑。采用ELISA法检测各组大鼠SP，β-EP和GnRH的含量；高效液相色谱法（HPLC）以SHIMADZU-10A高效液相色谱仪和L-ECD-6A电化学检测器检测下丘脑单胺类神经递质NA，DA，5-HT的含量。结果同正常对照组相比，模型组大鼠下丘脑GnRH、SP明显

2、增高，β-EP与NA、DA、5-HT含量明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较，何首乌饮组下丘脑GnRH、SP明显下降，β-EP与NA、DA、5-HT含量显著升高，呈现一定的剂量依赖性。结论衰老时大鼠下丘脑正常功能被破坏，何首乌饮通过对神经递质紊乱的调节而延缓了下丘脑的衰老。【关键词】何首乌饮；下丘脑；神经递质　　Abstract：ObjectiveToinvestigatethechangesofhypothalamusbrainneurotransmitterofagingratsandmechanis

3、msofHeshouusaging.MethodsThesub-acutelyagingmodelinisteredoncedailyfor60daysafteraginginduction.TheratsputatedbyheadandthehypothalamusethodofELISAtodetectSP,β-EPandGnRH.Theconcentrationofmonaminetransmittersincludingnoradrenaline(NA),dopamineparedalgroup(P<0.05).HS

4、SF），冰浴下将组织研磨成浆后4℃离心取上清。分别用双抗夹心ELISA法检测GnRH、SP、β-EP（GnRH、SP、β-EP试剂购自R＆B公司）。　　2.2下丘脑单胺类神经递质含量的测定　　2.2.1对照品溶液的配制精确称取对照品去甲肾上腺素　　（noradrenaline,NA）、多巴胺（dopamine,DA）、5-羟色胺（5-hydroxytrypatmien,5-HT），配成浓度分别为30，15，10ng/μl的标准混合溶液500ml。（NA、DA、5-HT试剂购自FLUCA公司）。　　2.2.2样品制备取下丘脑，称重后

5、置于400μl0.1mol/L高氯酸溶液中，冰浴下用内切式匀浆器匀浆，4℃离心40min，取上清液10μl进样。　　2.2.3色谱条件流动相：乙酸钠缓冲液-甲醇（96∶4），过饱和柠檬酸调pH=4.9；流速：1.2ml/min；色谱柱：DiscoveryC18(250mm×4.6mm)5μm；柱温：室温。　　精密量取上述对照品混合溶液各0.1，1，3，6ml，分别置于10ml容量瓶中，双蒸水稀释至刻度，得到一系列浓度的标准品混合溶液，分别取10μl进样，记录峰面积积分值。以浓度为横坐标，峰面积积分值为从纵坐标作标准曲线，并进行回归

6、计算，所得回归方程分别为：NA：Y=69.3196+70146.2927X，r=0.9999；DA：Y=3557.9203+7771405X，r=0.9998；5-HT：Y=-9252.2528+168666.7295X，r=0.9999。说明NA在0.290～28.96ng/μl范围内、DA在0.16～28.96ng/μl范围内、5-HT在0.102～10.20ng/μl范围内线性关系良好。　　2.2.4精密度测定取对照品混合溶液10μl进样，重复进样5次，分别记录色谱峰面积积分值，计算RSD为1.02%，说明仪器精密度和操作精

7、密度较好。　　2.2.5溶液稳定性检测将对照品混合溶液在0，1，3，5，7h分别进样，进样量为10μl，分别记录色谱峰面积积分值，计算RSD为2.31%，说明在7h之内对照品混合溶液基本稳定。　　2.2.6回收率测定在4组下丘脑组织匀浆上清液中以一组为空白组，另三组分别加1，2，3ng的NA、DA、5-HT标准混合液，10μl进样。测得值分别减去空白组测得值，然后分别除以1，2，3，得回收百分率。各组n=5，结果见表1。结果表明上述含量测定方法回收率良好。　　2.3统计学分析所有数据均以±s表示，应用SPSS11.5统计软件进行统

8、计处理，用One-WayANOAY方差分析，均数间两两比较行SNK法Q检验，均以P<0.05作为差异有统计学意义的标准。　　3结果　　3.1大鼠下丘脑单胺类神经递质含量变化模型组大鼠下丘脑NA、DA、5-HT与正常组相比，含量明显下降（P&l