何首乌饮对自然衰老大鼠精子质量的影响

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1、-----摘要摘要何首乌饮由何首乌、肉苁蓉、怀牛膝、淫羊霍、丹参、茯苓六味中药配方而成。目的：研究何首乌饮对自然衰老大鼠精子质量的影响。方法：1.实验动物与分组选用12月龄Wistar大鼠70只，将动物分为青年对照组，自然衰老组，何首乌丸组，何首乌饮1组、2组。青年对照组在12月时取材；自然衰老组在饲养到16月时灌胃等量的生理盐水；何首乌饮组1组大鼠在饲养到16月时灌胃何首乌饮60d，何首乌饮2组在饲养到17月时灌胃何首乌饮30d；何首乌丸组在饲养到16月时灌胃何首乌丸60d。2.样本的收集大鼠称重后，水合氯醛麻醉，内眦眶后静脉丛取血

2、2ml，离心后取上清液用于检测血清睾酮的浓度。酒精消毒，取附睾尾部，用生理盐水漂洗2次，剪3刀，置于盛有1ml37℃生理盐水冻存管中，37℃水浴箱中孵育30min，检测精子质量。取睾丸，称量,计算睾丸指数。3.观察指标3.1血清睾酮浓度测定：采用生物化学发光法检测各组大鼠血清睾酮的浓度。3.2大鼠睾丸指数的计算：睾丸指数=睾丸湿重/体重×100%。3.3光镜观察:睾丸组织采用常规处理，HE染色，观察睾丸组织形态学变化。3.4精子质膜完整性观察：采用乙酰乙酸盐+碘化丙啶染色法，从冻存管中取出新收集的精子悬液，离心后去上清，PBS洗涤2次

3、，调整精子浓度至5×106/ml，加入乙酰乙酸盐染液使其终浓度至20μg/mL，37℃避光染色3min，然后加入碘化丙啶染液使其终浓度至5μg/mL，染色3min，涂片后用荧光显微镜计数200个精子（头部绿色荧光的为质膜完整的精子，红色荧光为质膜破损的精子），计算头部绿色荧光的精子的百分数。3.5精子线粒体功能检测：从冻存管中取出新收集的精子悬液离心后去上清，PBS洗涤2次，离心去上清，加入100μl20μg/ml的罗丹明123，37℃避光染色30min，I----摘要用0.1MPBS调至精子浓度至5×106/ml，荧光显微镜下观察，

4、发绿色荧光的精子线粒体功能正常，而发弱荧光或荧光出现分节现象说明线粒体功能减弱。计数200个精子，计算发绿色荧光精子的百分数。3.6精子DNA完整性检测：采用精子DNA吖啶橙荧光检测试剂盒检测精子DNA完整性。从冻存管中取出新收集的精子悬液放入EP管中，离心去上清，加入1ml清洁液A洗涤2次，离心去上清，调精子浓度至5×106/ml，涂片，晾干后加入200μl固定液B，室温固定2h，滴加染色液C，室温避光染色5min，然后用清洁液A冲洗2～3次，荧光显微镜观察，头部发绿色荧光的为DNA正常精子，发红色或黄色荧光的DNA异常精子。计数2

5、00个精子中头部发绿色荧光的精子百分数。结果：3.1自然衰老组血清睾酮含量明显低于青年对照组(P<0.01)，何首乌饮1、2组和何首乌丸组均能不同程度提高睾酮的浓度，与自然衰老组比较，显著升高(P<0.05)，且何首乌饮1组睾酮浓度升高最为显著。3.2自然衰老组大鼠睾丸指数比青年对照组显著下降（P<0.01）；何首乌饮1、2组和何首乌丸组睾丸指数比自然衰老组大鼠显著增加，何首乌饮1组疗效最佳。3.3青年对照组，睾丸生精小管边界整齐，无萎缩及塌陷，界膜完整，无增厚及纤维化；管腔内可见排列整齐的各级生精细胞和支持细胞，管腔内可见精子。自然

6、衰老组，睾丸生精小管基膜部分增厚，边界不完整，有萎缩和塌陷，生精细胞层数明显减少，细胞稀疏；何首乌饮和何首乌丸干预后大鼠睾丸生精小管的形态结构明显改善，基膜趋于完整，生精上皮细胞层数增多，何首乌饮1组明显好于其他各组。3.4质膜完整性检测结果显示：自然衰老组大鼠发绿色荧光的精子数量比青年对照组显著下降（P<0.01）；而何首乌饮1、2组和何首乌丸组发绿色荧光的精子数比自然衰老组大鼠显著增多，且何首乌饮1组疗效好于其余各组。3.5精子线粒体功能检测结果显示：自然衰老组大鼠发绿色荧光精子数量比青年对照组显著下降（P<0.01）；而何首乌饮

7、1、2组和何首乌丸组发绿色荧光的精子比自然衰老组大鼠显著增多，且何首乌饮1组疗效最佳。3.6精子DNA完整性检测结果显示：自然衰老组大鼠头部发绿色荧光精子数量明显减少，发红色或黄色荧光的DNA异常精子显著增多，与青年对照组比较有显著性差异（P

8、III----AbstractAbstractHeshouwuyinisacomplexpreparationwhichisfromsixkindsofChineseherbs(Heshouwu,Roucongrong,