丹皮降糖活性及化学成分研究

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1、丹皮降糖活性及化学成分研究大连医科大学附属第一医院116600摘要：目的：研究丹皮降糖活性部位及化学成分。方法：以糖尿病小鼠为动物模型，对丹皮不同提取物进行降糖活性评价。通过硅胶柱色谱、反相柱色谱等方法对牡丹皮有效成分进行分离，通过1H-NMR、13C-NMR、薄层色谱对分离的3个化合物进行结构解析。结果：丹皮水提取降糖活性明显，50%及95%乙醇提取物降糖活性较弱。得到化合物分别为（+）-儿茶素、丹皮酚、没食子酸。结论：丹皮水提物只有降糖活性。关键词：丹皮；糖尿病；化学成分丹皮为毛茛科苟药属植物牡丹（Pa

2、eoniasuffruticosaAndr.）的于燥根皮，有清热凉血、活血消瘀的功效，主要用于治疗温毒发斑，疮疡痈肿，经闭痛经,跌打损伤等症。近年来，岡内外对该楨物的药理活性研究发现其在降糖、抗菌、消炎、治疗心血管疾病等方面只有较好疗效［1］。木研究对牡丹皮的活性部位进行确定，并进行化学成分分离及结构鉴定实验1仪器与材料四氧嘧啶（Fluka公司），葡萄糖试剂盒（北京北化康泰临床试剂有限公司）实验动物：健康昆明种小鼠，纟，体重25-33g,购于沈阳药科大学实验动物中心。离心机（长沙湘仪离心机有限公司）、紫外分

3、光光度计（Unico-2100）。牡丹皮购于沈阳天益堂大药房；柱色谱硅胶及薄层色谱硅胶购于青岛海详化工有限公司；其它化学试剂均购于天津四友化学试剂有限公司。2实验方法2.1牡丹皮粗提物的制备取干燥的牡丹皮约500g,共三组，分別以蒸馏水、50%乙醇、95%乙醇冋流提取三次。过滤，蒸干，真空干燥后得丹皮粗提物。2.2降糖评价方法取100只健康的毘明种雄性小駁，体重25-33g。分为五组：正常组、阴性对照组、蒸馏水提取组、50%乙醇提取组、95乙醇提取组，每组20只分笼饲养3天。各组小鼠隔夜禁食不禁水12h。尾

4、静脉注射1%四氧嘧啶的生理盐水溶液，注射容量为0.07ml/mg,注射后恢复正常饮食，并观察造模小鼠体重变化。注射后72h,再次让所有小鼠禁食不禁水6h。眼眶取血，按GOD法测定血糖值。筛选FPG≥11.0mmol/l者作为糖尿病小鼠。将造模成功小鼠重新分组。正常组不给药，阴性组为0.5%CMC-Na液,各提取物组分别给药200mg/kgy药物以5%CMC-Na为助悬剂。连续给药两周，每周测定一次空腹血糖值FPG。每次测定FPG前均禁食禁水6h,并于取血前lh末次给药。2.3提取与分离干燥的丹皮(6.

5、0kg),水冋流提取3次，每次2小吋，提取物回收至无醇味后补加水至2L通过大孔树脂，先用水洗脱至样品流出量减少，再用95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱部分，冋收溶剂，得浸膏。浸膏经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇梯度洗脱，继以正相硅胶分配柱色谱、反相ODS柱色谱等方法，分离得到3个化合物，3结果3.1丹皮提取物降糖活性测定造模后小鼠食量明显增加，鼠笼垫料易湿，说明小鼠出现了“三多一少”现象。造模后部分小鼠空腹血糖值FPG>ll.lmmol/l，表明造模成功，采用糖尿病病理模型小鼠进行丹皮不同提取部位进行降糖活性评价，

6、结果见表1。3.2化合物结构确定化合物1:白色粉末。13C-NMR(CD3OD)δ：83.0(C-2),69.1(03),28.9(C-4),157.3(C-5),95.8(C-6),156.9(C-7),96.5(C-8),101.1(C-4a),157.4(C-8a),132.5(C-l’),115.6(C-2’),146.5(C-3’),146.5(C-4’)，116.4(C-5’)，120.3(C-6’)。13CNM

7、R数据与文献[2】对照一致，鉴定化合物1为(+)-儿茶素。化合物2:白色针状结晶(氯仿)，与三氯化铁反应显蓝黑色。ESI-MSm/z：167[M+H]+,189[M+Na]+，205[M+K]+。与标准品TLC的Rf值及显色行为一致，故化合物2鉴定为丹皮酚。化合物3:白色固体，ESI-MSm/z：209[M+K]+。1H-NMR(CD3OD)δ：7.04(2H,s,H-2,6)。13C-NMR(CD3OD)δ：121.9(C-l),110.3(C-2,6),146.4(C-3,5),

8、139.6(C-4),170.4(CO)。与标准品TLC的Rf值及显色行为一致，故化合物3鉴定为没食子酸。4讨论实验结果表明，丹皮不同溶媒提取物均具冇一定降糖作用，以水提取物降糖效果最为明显。酚酸类化合物及单萜类化合物是牡丹皮的主要奋效成分，本研宄对牡丹皮有效成分进行分离活性追踪并分离出3种化合物，儿茶素、没食子酸、丹皮酚。丹皮酚是牡丹皮主要有效成分之一。通过本研究，为以后更好的研宄牡丹皮有效成分的分离以及丹皮酚