川乌植物内生真菌的分离和分类鉴定论文

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1、川乌植物内生真菌的分离和分类鉴定论文李治滢陈有为杨丽源李绍兰吴少华【摘要】目的从川乌植物的根和茎中分离内生真菌，并进行分类鉴定。方法经显微形态观察进行内生真菌的分类鉴定。结果川乌植物根和茎中分离获得61株内生真菌，归属为2纲，5目，6科，17个属。结论川乌植物不同部位内生真菌的数量、组成与种群分布存有差异；从川乌植物中分离内生真菌尚属首次报道。【关键词】川乌；内生真菌；分离；分类鉴定Abstract：ObjectiveToisolateandidentifysomeendophyticfungifromtherootandstemofRadixAconiti.Me

2、thodsIdentificationofendophyticfungifromRadixAconitiorphology.ResultsSixty-onestrainsofendophyticfungiRadixAconiti，iliesandfiveorders.ConclusionThediversitiesmadeobviouslyagreatdifferenceinquantity,positionanddistributionoftheendophyticfungifromRadixAconiti.Key）、中乌头碱（Misaconitine）、次乌头

3、碱（Hypaconitine）等。乌头碱具有强心、镇痛、抗肿瘤、调节免疫等的作用，临床上主要用于治疗恶性肿瘤、类风湿性关节炎、风湿性关节炎、痛风等慢性疾病。现代止痛新药多含有乌头类生物碱，对慢性疼痛的止痛效果并不低于西药，说明乌头类生物碱在缓解疼痛疾病方面已经引起临床医学的关注。与此同时，药理学研究还表明乌头碱在抗肿瘤方面也具有良好的临床应用前景［1］。目前，植物内生菌的研究国内外已经成为热点领域，以往对川乌植物的研究主要针对植物化学成分的报道为多，而对该植物内生真菌的发现、种类组成、数量与分布和种群多样性及其代谢活性物质的研究报道至今未见。为此，我们对川乌植物内

4、生真菌作了系统的研究，包括菌株分离、分类学地位、种群组成、数量与分布、代谢活性产物的分离等。本文就川乌植物内生真菌分离和分类鉴定的资源学方面研究报道如下。1材料1.1植物样品活体植物川乌（RadixAconiti）采自云南省会泽县大海乡中草药种植基地，海拔高度3150m。1.2培养基分离培养基：PDA培养基（马铃薯葡萄糖培养基），临用时每毫升培养基中加80单位的青霉素以抑制细菌生长。分类鉴定培养基：PDA培养基和促孢培养基（KH2PO4，MgSO4·7H2O，KNO3，KCl，葡萄糖，蔗糖）。2方法2.1内生真菌的分离首先用自来水冲洗净川乌植物的根、茎表面的泥沙，

5、接着进行表面消毒［2］，切成0.3cm×0.3cm大小的片段种植在PDA培养基里，置于(28±1)℃的温箱中静止培养。培养3～12d后，可见有菌丝生长，挑取植物组织周围的菌丝转接入PDA试管斜面，经纯化即得川乌植物内生真菌。2.2内生真菌的分类鉴定采用插片培养方法，对分离获得的内生真菌进行显微形态特征的观察、结合形态学分类方法，鉴定检索参照文献［3,4］。3结果3.1川乌植物内生真菌的种群组成从川乌植物中分离获得61株内生真菌，经显微形态观察，分属于2纲，5目，6科，17属（见表1）。表1川乌植物内生真菌种群组成（略）从表1还可看出，在分离获得的61株内生真菌中，

6、毛壳菌属Chaetomium最多，为12株，占菌株数的19.67%；束丝菌属Ozonium有6株，占9.84%；葡萄孢属Botrytis、匐柄霉属Stemphylium、交链孢霉属Alternaria和镰孢霉属Fusarium均为5株，占菌株数的8.20%。这6属为川乌植物内生真菌的优势属，占总数的62.30%。槲果孢属Balanium、亚黑团孢属Periconiella和枝孢属Cladosporium均只有1株，只占1.64%。3.2川乌植物内生真菌在植株不同部位的分布在分离获得61株乌头植物内生真菌中，根部分离所得的内生真菌在数量和种属上都是最多的，有41株（

7、占菌株数的67.21%）14个属（占17个属的82．35%）；其余20株在茎部获得(占菌株数的32.79%)，分属9个属（占52.94%）。见表2。从表2可以看出，毛壳菌属为川乌植物根部的内生真菌的优势菌属，有11株，占根部的26.83%；川乌植物茎部的内生真菌的优势菌属为匐柄霉属(5株占茎部的25%)；拟鞘孢属Chalaropsis、枝孢属Cladosporium、指轮枝孢属Stachylidium、茎点霉属Phoma、组丝核菌属Phacodium、丝葚霉属Papulospora和毛霉属Mucor共8个属只在根部分离得到；而匐柄霉属、槲果孢属Balanium和亚

8、黑团孢属P