压力超负荷大鼠心室肌细胞bax、bcl论文

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1、压力超负荷大鼠心室肌细胞Bax、Bcl论文罗承锋，黄衍寿，刘月婵，冼绍祥，洪永敦，刘煜德【关键词】心室肌细胞摘要：【目的】观察腹主动脉缩窄造成的压力超负荷大鼠模型左心室肌细胞B细胞淋巴瘤/白血病基因蛋白(Bcl2蛋白)及其家族成员Bax蛋白表达的序列变化。【方法】压力超负荷大鼠各时间点(造模后1、4、7、10、21、30、40d)Bax、Bcl2蛋白的表达用流式细胞仪进行胞内抗原定量检测。【结果】在腹主动脉缩窄之后第1天，大鼠左心室肌细胞Bax蛋白的表达率较高(6375%)，Bcl2蛋白的表达率则较低(3145%).freeladzu)

2、；抽滤器(NALGENE,Nalgepany)；离心机(LD52A，北京医用离心机厂)；光学显微镜(BH2，Olympus)；流式细胞仪(EPICSALTRA，BeckmanCoulter)。Ficoll(Sigma,华美生物工程公司分装，批号：38H0588)；多聚甲醛(广州化学试剂厂，批号：99010136)；小鼠抗大鼠BaxAb4(6A7)(Neomarkers，批号：714P010)；小鼠抗大鼠Bcl2αAb4(10C4)(Neomarkers，批号：598P111)；藻红蛋白(RPE)标记的羊抗小鼠F(ab′)2IgG(Ser

3、otec，批号：280901)；封闭用羊血清(北京中山生物技术有限公司，批号：ZLI9021)；RPE标记的羊F(ab′)2IgG(SouthernBiotechnologyAssociateInc，批号：J366EM(DulbeccosModifiedEagleMedium)的冻存管中，程序冷冻，最后保存于液氮中备用。15心肌细胞的分离与纯化［３］从液氮中取出保存的心脏，迅速放入40℃水浴中解冻；用DMEM清洗心脏；将左心室剪碎成1mm３的小块，于KrebsHenseleit液中吹打10min以分离心肌细胞，必要时可重复1次；将含心肌

4、细胞的溶液用100目网筛过滤，800r/min离心5min，01molL－１磷酸盐缓冲液(PBS)清洗2次，800r/min离心5min；将沉淀轻轻加入40gL－１的Ficoll上，400r/min离心4min，弃上清，沉淀即为高纯度的杆状的心肌细胞。16Bax、Bcl2蛋白的检测［４，５］将所分离出的心肌细胞计数，各取1×１０６个细胞，分别加入4支试管中；40gL－１多聚甲醛固定60min，1500r/min离心，弃上清，PBS清洗2次；将细胞重悬于10mLL－１Tin,1500r/min离心，PBS清洗3次；每管加入封闭用羊血清10

5、0μL,20min，5mLL－１Tin，加入5mLL－１Tin，1500r/min离心，PBS清洗2次；每试管中加入5μLRPE标记的羊抗小鼠抗体或10μLRPE标记的羊抗小鼠的同型对照，室温下孵育30min，加入5mLL－１Tin，1500r/min离心，PBS清洗2次；各试管中加入PBS400μL，待上机检测。使用ALTRA流式细胞仪进行Bax和Bcl2蛋白的检测，结果用Bax、Bcl2的表达率和平均荧光强度表示。2实验结果21造模结果24只大鼠中死亡8只，死亡大鼠均于3d内死于急性左心衰，解剖发现双肺明显瘀血，部分还伴有胸腔积液，

6、其死亡与急性压力超负荷有关。22各时间点大鼠心脏质量变化从图1和图2可以看出，大鼠在造模后心脏质量(mheart)、左心室的质量(mLV)逐渐增加，第30～40天之间，其增幅有所减少；心脏、左心室质量与体重之比，即心脏质量指数(CMI，IＣＭ＝mheart/mbody)、左心室质量指数(LVMI，IＬＶ＝mLV/mbody)，亦随时间的延长而增加，约于第30天达到最高值，可能与后负荷增加引起的代偿性肥厚有关，到第40天时，二者的比值已开始降低。23各时间点心肌细胞中Bax、Bcl2的表达情况从图3～5可以看出，在腹主动脉缩窄后第1天，大

7、鼠左心室心肌细胞Bax蛋白的表达率较高(6375%)，第4天已下降，在以后的时间中，其表达率变化不大，波动于50%～60%之间；Bcl2蛋白的表达率于第1天时较低(3145%)，随后上升，第7天升至最高值(7175%)，尔后开始下降，第30天时其表达率最低(228%)；RBax/RBcl2于第1天时较高，第4天时已下降，第7天时降至最低，随后开始逐渐上升，第30天达到峰值(24)，到第40天时又下降，两者荧光强度比值的序列变化基本与表达率之比相似，其第1天的变化可能与突然的压力超负荷有关。3讨论心脏的压力超负荷情况下，心脏首先代偿性地向

8、心性肥厚，随后，心肌细胞增长，心室腔的扩大，心室几何形态的变化，心肌细胞外间质发生胶原沉积和纤维化，即心室重塑，最终因失代偿而发生心衰，在此过程中心功能的进行性恶化可能与心肌细胞凋亡有关［１，６］。细胞凋亡