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《原发性肝癌组织中肝素酶表达与肝癌侵袭 转移关系的研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、原发性肝癌组织中肝素酶表达与肝癌侵袭转移关系的研究论文.freelRNA及Hpa蛋白在肝细胞肝癌、癌旁肝组织及肝癌细胞株中的表达。结果肝癌HpamRNA和蛋白的表达显著高于癌旁及正常肝组织(P0.05),肝癌组织中HpamRNA的表达与TNM分期、Edmondson分级和复发有关(P0.05)。结论HpamRNA及蛋白在肝癌中高表达,并与肝癌的侵袭转移、复发、预后有关。【关键词】肝细胞肝癌乙酰肝素酶侵袭转移复发【Abstract】ObjectiveThemainaimofthisinvestigationistoexploretheexpress
2、ionofheparanasemRNAandproteininhepatocellularcarcinoma(HCC)anditsrelationshiperasechainreaction(RT-PCR)andimmunohistochemicalstainingRNAandproteininnormalhepatictissues,tumortissuesandadjacenttissuesofhepatocellularcarcinoma.ResultsTheexpressionofHpamRNAandproteininHCCtissues
3、alhepatictissues(P0.05).Itondson-Steiner’sclassification(P0.05).ConclusionOverexpressionoftheheparanasemRNAandproteinrelatestotheinvasion,metastasis,recurrenceandprognosisofhepatocellularcarcinoma.【KeyaHeparanaseInvasionMetastasisRecurrence乙酰肝素酶(heparanase,HPA)是1999年克隆分离出的一种葡
4、糖苷酸内切酶。它可降解硫酸乙酰肝素(hearansulfate,HS),破坏细胞外基质和血管基底膜,并促进肿瘤新生血管生成,使肿瘤细胞实现侵袭转移。作者运用RT-PCR和免疫组织化学法对HpamRNA及Hpa蛋白在肝细胞肝癌、癌旁肝组织及肝癌细胞株中的表达进行检测,检测33例原发性肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)标本中HPA的基因表达,.freel8例,＞5cm25例;癌灶包膜完整14例、不完整19例;甲胎蛋白(AFP)阳性26例、阴性7例;HBsAg阳性27例、阴性6例;合并明显肝硬化18例、无明显肝硬化15
5、例;肿瘤EdmondsonⅠ、Ⅱ级13例、Ⅲ、Ⅳ级20例;TNMⅠ、Ⅱ期18例、Ⅲ、Ⅳ期15例。随访有和无转移复发各14例。肝脏良性肿瘤9例中男4例,女5例;年龄32～65岁,平均41岁;其中肝海绵状血管瘤8例、肝局灶性结节性增生1例。1.2总RNA提取和半定量RT-PCR检测Trizol总RNA分离试剂盒(Gibco)Trizol一步法提取组织总RNA,甲醛变性胶电泳鉴定及紫外分光光度仪测定OD值后,逆转录合成cDNA。AMV为TaKaRa公司产品,dNTP购自上海生物工程公司。HPA引物参照文献［１］设计,由上海生物工程公司合成,上游为5’-
6、2TTCGATCC2CAAGAAGGAATCAAC23’,下游为5-2GATTCAGTTA2CATGGCATCACTAC-3’,其扩增片段长度为585bp。采用β2actin作为内参照,其引物由上海博亚生物公司合成,上游序列为5’2TTCCAGCCTTCCTTCCTGG23’,下游为5’2ATTGCTCCTCCTGAGCGCAA23’,扩增片段长度为224bp。按50μl反应体系行PCR扩增。TagTMDNA聚合酶为TaKaRa产品。HPA扩增条件为94℃预变性4min,后转入94℃变性30s、57℃退火45s、72℃延伸1min循环,共35个周
7、期,然后再72℃延伸5min。取10μl产物于112%的琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭紫外灯下观察拍照。1.3免疫组织化学染色方法及结果判定标本常规甲醛固定取材、脱水、石蜡包埋后做4μm连续切片,按SP免疫组织化学染色试剂盒染色步骤进行,Hpa表达阳性为细胞浆染成棕黄色,在光镜下观察5个高倍视野,计算阳性细胞数,阳性细胞数≤10%为阴性表达,10%为阳性表达。1.4统计学处理结果数据采用χ2检验或四格表确切概率法分析。2结果2.1HPAmRNA在肝癌组织中的表达经RT-PCR扩增后电泳观察发现33例HCC癌组织中有16例HPA表达阳性,阳性率为48%(
8、16/33);而癌旁肝组织仅1例HPA表达呈阳性;9例正常肝组织均阴性。经统计学处理P值＜0101分别(前者χ2值171827,P010
