nk细胞对人鼻咽癌细胞cne2裸鼠皮下移植瘤的抑制作用论文

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1、NK细胞对人鼻咽癌细胞CNE2裸鼠皮下移植瘤的抑制作用论文梅家转，郭坤元，吴远彬，周健,魏红梅【摘要】目的研究同种异体NK细胞对人鼻咽癌细胞（E2）裸鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法PCRSSP法检测E2细胞HLAA、B、Cmol/lEDTA，MiltenyiBiotec公司产品)，CD56MicroBeads(MiltenyiBiotec公司产品)，RPMI1640(Gibco公司产品)，淋巴细胞分离液(上海试剂二厂产品)，rhIL2、PHA(Sigma公司产品)，人鼻咽癌细胞株E2购于军事医学科学院。1.2方

2、法1.2.1NK细胞的分离纯化采用常规密度梯度离心法分离3例健康人外周血单个核细胞，PBS洗涤2次，计数细胞，CD56MicroBeads作MACS细胞阳性分选，获得CD3－CD56+细胞即为NK细胞。1.2.2细胞培养细胞培养基为含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640。培养NK细胞时加入1000U/mlrhIL2，PHA10μg/ml。1.2.3E2细胞表面HLAA、B、Cl含1×106个肿瘤细胞的悬液，用1ml注射器将0.1ml细胞悬液注射于BALB/c裸鼠背部皮

3、下，NK细胞治疗组，NK细胞悬于无血清RPMI1640培养基中计数，配制成每0.2ml含3×107个细胞的悬液，用1ml注射器将0.2ml细胞悬液经尾静脉注射于BALB/c裸鼠体内(每例健康者的NK细胞分别注射2只BALB/c裸鼠)，尾静脉注射NK细胞与皮下注射E2细胞同一天进行。1.3.3肿瘤生长情况监测及肿瘤的病理变化观察自细胞注射之日起，观察两组裸鼠成瘤时间、成瘤率，待肿瘤出现后用游标卡尺测量肿瘤块2个方向的直径,分别记为ａ、ｂ，肿瘤体积计算公式：V=1/2ab24。肿瘤出现后3周处死裸鼠，测肿瘤重量,计

4、算肿瘤生长抑制率：肿瘤生长抑制率＝(1-处理组肿瘤重量/对照组肿瘤重量)×100％5。肿瘤标本称重后,常规福尔马林固定,石蜡包埋,5μm连续切片,分别行HE染色，观察病理变化。1.4统计学方法应用SPSS10.0软件进行数据处理，数据以±s表示，采用独立样本t检验。2结果2.1NK细胞的纯度流式细胞仪检测CD3－CD16+CD56+细胞的纯度为(91.23±0.85)%。2.2E2细胞表面HLAA、B、CJS,AuGK,etal.ConitantchemoirradiationforstageⅢⅣnasoph

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