裸鼠腹腔输注体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症病人骨髓cd34+cd59+细胞的研究论文

《裸鼠腹腔输注体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症病人骨髓cd34+cd59+细胞的研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、裸鼠腹腔输注体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症病人骨髓CD34+CD59+细胞的研究论文.freelalnocturnalhemoglobinuria，PNH）病人的CD34+CD59+细胞进行移植，研究其增殖能力和重建造血的情况.freelPatientsalNocturnalHemoglobinuriaAbstractExvivoexpandedhumanbonemarropatientsalnocturnalhemoglobinuria(PNH)iceinordertoinvestigatetheirproli

2、ferationabilityandreconstructionofhemopoiesis，andtolaythegroundthebonemarroononuclearcellsinPNHpatientsbyusingimmunomagicpositivedoublesorting.SublethallyirradiatedBALB/cmicebonenarroanCD45+cellsarroicebyfloetryandDNAanalysisat6iceeextent，butdidnotfullyrecover.

3、ItisconcludedthatexvivoexpandedbonemarropatientsalnocturnalhemoglobinuriacouldkeeptheirbiologicalcharacteristicsandabilitytoreconstructhemopoiesisinirradiatedBALB/cmice.Keyalnocturnalhemoglobinuria；CD34+CD59+cells；cellexpansion；nudemice阵发性睡眠性血红蛋白尿(paroxysmalnoc

4、turnalhemoglobinuria，PNH)是一种慢性溶血性疾病，其治疗长期以来一直停留在对症处理上，同种异体骨髓移植是目前唯一有效的根治方法，但由于HLA相合供体的缺乏、异体移植造成的免疫排斥和治疗费用的昂贵限制其广泛应用。因此，寻找有效的根治PNH的疗法是我们临床医生迫切需要解决的问题。由于PNH病人体内正常克隆与异常克隆并存，因此可以考虑对PNH病人进行自体骨髓移植（ABMT）或自体外周血干细胞移植（APBSCT）。PNH病人的造血祖细胞可以在体外收集，应用免疫磁珠双阳性标记的方法将正常细胞与异常克隆分开

5、，对正常细胞在一定条件下进行体外扩增，待化疗和（或）免疫抑制剂尽量减少患者体内异常造血干／祖细胞后，再回输给病人重建造血以期根治PNH。我们以前的工作表明，应用免疫磁珠方法对细胞可进行两次分选得到高富集度的CD34+CD59+细胞，并对CD34+CD59+细胞进行体外扩增，但扩增的细胞能否在体内担当重建造血的重任？本研究以BALB/c裸鼠为动物模型对此问题进行了探讨。以裸鼠为动物模型对PNH患者造血细胞进行研究的问题，国内尚未见有报道。本研究的结果将会加深对PNH发病机制的认识，并为PNH根治途径的探讨提供重要的实验

6、依据。材料和方法研究对象8例PNH患者系我院门诊和住院的病人，均按文献〖1］标准确诊，经髂骨穿刺肝素抗凝获取骨髓。CD34+CD59+细胞的［2］免疫磁珠双阳性法分离富集常规分离骨髓单个核细胞(BMMNC)；CD34单克隆抗体标记及CD59单克隆抗体标记与免疫磁珠结合；用MiniMACS分选CD34+细胞；然后分离CD34+CD59+细胞及CD34+CD59-细胞；再用流式细胞仪测定CD34+CD59-细胞与CD34+CD59+细胞的比例。细胞体外扩增培养用本实验室成熟的体外扩增培养体系进行扩增［3］，分别于第4、7

7、、10、14天半量换液，补充含相同细胞因子及浓度的IMDM（表1），取出细胞进行有核细胞计数，台盼蓝染色，进行CD34+CD59+细胞比例测定及各系造血祖细胞检测。CD34+CD59+细胞的扩增倍数由下述公式计算得出：扩增倍数＝（扩增后的有核细胞数）×（CD34+CD59+％）÷扩增前的基数裸鼠骨髓移植BALB/c裸鼠（中国医学科学院动物所提供），雌雄各半，6-8周龄，体重16-20g，所有裸鼠在相对无菌及无特定病原体条件下饲养于中国协和医科大学北京协和医院动物房。移植前3小时接受X线照射预处理，照射面积35cm×3

8、5cm，照距100cm，剂量率200cGy/min，照射时间2.00-2.75分钟，总剂量400-550cGy［4，5］。实验分组实验组(8只)：经腹腔输注扩增后第7天含1×105的CD34+CD59+细胞；阴性对照组(4只)：输注等量的无细胞培养液。Table1.SourceandfinalconcentrationofrHGFs（略）人造血