裸鼠腹腔输注体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症病人骨髓cd34+cd59+细胞的研究

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1、裸鼠腹腔输注体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症病人骨髓CD34+CD59+细胞的研究作者：钟玉萍，武永吉，沈悌，汪玄，张洁萍【摘要】应用BALB／c裸鼠为移植模型，将在体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（paroxysmalnocturnalhemoglobinuria，PNH）病人的CD34+CD59+细胞进行移植，研究其增殖能力和重建造血的情况，为实现PNH患者进行临床自体骨髓移植（ABMT）或自体外周血干细胞移植（APBSCT）奠定基础。本研究利用免疫磁珠双阳性分选法，从PNH患者骨髓中分离出足够

2、数量的CD34+CD59+细胞进行体外扩增，并将体外扩增的细胞输注给接受亚致死剂量照射的BALB／c裸鼠。结果显示：移植6周后，用流式细胞术和DNA检测方法均检测到裸鼠骨髓、脾脏和外周血中人的CD45+细胞，而接受PNH病人CD34+CD59+细胞移植后的裸鼠，其血常规指标有一定恢复，但并未完全恢复。结论：PNH病人骨髓CD34+CD59+细胞体外扩增后仍能保持造血祖细胞的生物特性，在照射的裸鼠中能重建造血。【关键词】阵发性睡眠性血红蛋白尿症　　NudeMiceIntraperitoneallyTran

3、sfusedPatientsalNocturnalHemoglobinuria　　AbstractExvivoexpandedhumanbonemarropatientsalnocturnalhemoglobinuria(PNH)iceinordertoinvestigatethEirproliferationabilityandreconstructionofhemopoiesis，andtolaythegroundthebonemarroononuclearcellsinPNHpatientsbyu

4、singimmunomagicpositivedoublesorting.SublethallyirradiatedBALB/cmicebonenarroanCD45+cellsarroicebyfloetryandDNAanalysisat6iceeextent，butdidnotfullyrecover.ItisconcludedthatexvivoexpandedbonemarropatientsalnocturnalhemoglobinuriacouldkeepthEIrbiologicalch

5、aracteristicsandabilitytoreconstructhemopoiesisinirradiatedBALB/cmice.　　Keyalnocturnalhemoglobinuria；CD34+CD59+cells；cellexpansion；nudemice阵发性睡眠性血红蛋白尿(paroxysmalnocturnalhemoglobinuria，PNH)是一种慢性溶血性疾病，其治疗长期以来一直停留在对症处理上，同种异体骨髓移植是目前唯一有效的根治方法，但由于HLA相合供体的缺乏、异

6、体移植造成的免疫排斥和治疗费用的昂贵限制其广泛应用。因此，寻找有效的根治PNH的疗法是我们临床医生迫切需要解决的问题。由于PNH病人体内正常克隆与异常克隆并存，因此可以考虑对PNH病人进行自体骨髓移植（ABMT）或自体外周血干细胞移植（APBSCT）。PNH病人的造血祖细胞可以在体外收集，应用免疫磁珠双阳性标记的方法将正常细胞与异常克隆分开，对正常细胞在一定条件下进行体外扩增，待化疗和（或）免疫抑制剂尽量减少患者体内异常造血干／祖细胞后，再回输给病人重建造血以期根治PNH。我们以前的工作表明，应用免疫磁

7、珠方法对细胞可进行两次分选得到高富集度的CD34+CD59+细胞，并对CD34+CD59+细胞进行体外扩增，但扩增的细胞能否在体内担当重建造血的重任？本研究以BALB/c裸鼠为动物模型对此问题进行了探讨。以裸鼠为动物模型对PNH患者造血细胞进行研究的问题，国内尚未见有报道。本研究的结果将会加深对PNH发病机制的认识，并为PNH根治途径的探讨提供重要的实验依据。　　材料和方法　　研究对象　　8例PNH患者系我院门诊和住院的病人，均按　　造血祖细胞在裸鼠体内分化的检测　　进一步分析裸鼠骨髓中CD45+的人的

8、细胞可以发现各系表达的标志。在实验中我们检测到B系的表达（CD19+）、T系的表达（CD3+）、髓系的表达（CD14+、CD33+）以及祖细胞的标志（CD34+、CD38+）。它们分别占CD45+细胞的（13.35±1.81）%、（3.50±1.23）%、（6.32±1.32）%、（11.28±1.03）%、（1.54±1.14）%和（4.71±1.12）%(图2）。　　特异性基因植入裸鼠的检测　　以正常人的阳性标本作为阳性对照，阴性对照未