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1、含有非甲基化CpG的双歧杆菌DNA对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响作者：安蔚，赵苗青，李雅林，李松，康莉，宋文刚【关键词】甲基化 StimulatoryeffectofbifidobacteriaDNAcontainingunmethylatedCpGmotifsonmaturationofbonemarroethylatedCpGmotifs(CpGDNA)onthematurationofbonemarroicDNAofbifidobacteriaethylateddegreeofCpGmoti
2、fsetry.ThelevelsofIL6,IL12(p40)andTNFαolecules,significantlyincreasedthesecretionofIL6,IL12(p40)andTNFαandsignificantlyenhancedtheproliferationofallogenicandhomogenicTcells.CONCLUSION:BifidobacteriaDNAhasremarkablestimulatoryeffectsonBMDCmaturationanda
3、ntigenpresentingfunction. 【Keyice 【摘要】目的：探讨双歧杆菌DNA对小鼠骨髓树突状细胞(BMDC)成熟的影响.方法：纯化提取双歧杆菌DNA，并鉴定DNA制品CpG基序甲基化程度；FACS检测BMDC的吞噬功能和表面标志分子，ELISA法检测BMDC分泌细胞因子水平，3HTdR掺入法检测T淋巴细胞增殖能力.结果：双歧杆菌DNA诱导24h后BMDC高表达Ia,CD40,CD86和CD11c分子，明显增加IL6,IL12(p40),TNFα的分泌，显著增强同种异体和自
4、体T细胞增殖的能力.结论：双歧杆菌DNA能够促进BMDC成熟，增强BMDC的抗原提呈能力. 【关键词】双歧杆菌DNA；树突细胞；小鼠 0引言 树突状细胞(dendriticcells,DC)是机体功能最强的专职抗原提呈细胞，它能高效摄取、加工处理和提呈抗原，有较强的迁移能力，并能显著地激活初始型T细胞，处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节［1-2］.DC是否成熟对其功能的发挥十分重要.近年来研究表明,细菌脂多糖（LPS）具有明确的诱导DC成熟并影响其功能的作用［3］，由此设想同样来自细菌含
5、有CpG的DNA很可能对DC分化发育和功能有一定的影响.我们利用我室提取的双歧杆菌基因组DNA(bifidobacteriaDNA,BDNA)，观察了其对小鼠骨髓树突状细胞(bonemarroega公司，LPS,小牛胸腺DNA(CalfthymusDNA,CTDNA),DextranFITC购自Sigma公司，溶菌酶、限制性内切酶HpaⅡ购自中国医学科学院友谊公司，小鼠IL6,IL12(p40),TNFαELISA检测试剂盒购自R＆D公司，RPMI1640完全培养基RPMI1640（Hyclone公
6、司）,100mL/L胎牛血清（Hyclone公司）组成，4℃保存备用；3HTdR购自Amersham公司，抗小鼠CD4(Gk1.5),CD8（2.43）,B220（RA3.3A1/6.1）,Iab(B212)单克隆抗体杂交瘤细胞株均购自ATCC，不同荧光素标记的大鼠抗小鼠单抗CD11cPE,CD40FITC,CD86PE,IabFITC及FITC或PE标记的同型对照抗体均购自PharMingen公司，4℃保存.C57BL/6（H2Kb）小鼠60只，Balb/c（H2Kd）小鼠24只，6～8/A280
7、nm为1.823，测定DNA浓度后经薄板层析证实所制备的BDNA中无LPS存在.BDNA与HpaⅡ酶作用后电泳结果显示，细菌DNA可被顺利切割成小片段，表明所制备的BDNA具有一定的非甲基化CpG基序，冷冻干燥后备用. 1.2.2小鼠BMDC的培养扩增［5］颈椎脱位法处死C57BL/c小鼠，无菌取股骨，冲洗出骨髓细胞，加TrisNH4Cl裂解液室温作用3min，溶除红细胞，Hanks液洗2次，加入大鼠抗CD4,CD8,Iab,B220单抗混合液，抗体终浓度均为10mg/L,4℃孵育45min,Ha
8、nks液洗1次，加入含20g/LBSA的RPMI1640培养基及Hepes25mmol/L沉悬细胞，再加入兔低毒性补体（10∶1稀释），37℃水浴45min溶除T,B及Ia+细胞，Hanks洗2次，以1×106细胞/孔加入24孔板培养，加mGMCSF10μg/L,mIL41μg/L，培养3d后，吸弃培养基及悬浮细胞，重新加入含有mGMCSF,mIL4的新鲜RPMI1640完全培养基，继续培养2d后，吹打下疏松贴壁的增殖性细胞聚集体，收集后BMDC以1×106细胞/孔加
