两株深海来源真菌次级代谢产物及抗肿瘤活性的分析

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1、两株深海来源真菌次级代谢产物及抗肿瘤活性的研究两株深海来源真菌次级代谢产物及抗肿瘤活性的研究捅要海洋微生物生存环境特殊复杂，其次级代谢产物结构新颖、种类繁多，是新结构活性化合物的重要来源。为了寻找结构新颖的活性化合物，本论文采用活性追踪的方法开展了海洋微生物的抗肿瘤活性筛选及2株深海来源真菌抗肿瘤次级代谢产物的研究工作。内容包括：浅海及深海来源的真菌及放线菌的分离与抗肿瘤活性筛选；活性菌株的初步评价及抗肿瘤活性成分的追踪分离；单体化合物的结构解析；单体化合物抗肿瘤活性的初步评价。从福建莆田、泉州浅海的

2、海泥及海水样品共8个样品中，分离得到真菌76株，放线菌57株；从采自太平洋深海海域的海水及海泥的6个样品中，分离得到真菌29株，放线菌2株。采用海虾生物致死法的一级筛选，并采用MTT或SRB法，以zsFT210和K562等细胞为模型进行体外抗肿瘤活性的二级筛选，分别从浅海样品中获得活性菌株真菌3株、放线菌8株；从深海样品中，分离得到活性菌株真菌7株；活性复筛并结合HPLC指纹图谱及薄层层析化学筛选，结果有2株真菌和3株放线菌具有海虾活性(海虾100％死亡，细胞毒活性无或弱)，8株真菌和5株放线菌既有海

3、虾活性又有细胞毒活性。在考察了目标菌株的发酵条件后，对深海来源的活性真菌c2b进行了大量发酵。又接替本实验室工作，得到了深海来源真菌F．23．2乙酸乙酯层的部分浸膏。对c2b发酵产物和F-23．2的部分浸膏运用溶剂萃取，薄层层析，正相、反相硅胶柱层析，LH．20凝胶柱层析，反相高压液相等化学的分离纯化手段，采用人慢性髓性白血病细胞K562为筛选模型，进行活性追踪分离。从F．23-2的部分浸膏中分离得到9个单体化合物(1．9)；从c2b的次级代谢产物中分离得到11个单体化合物(10．20)共20个化合物

4、。继而，利用理化性质和波谱学方法(取，UV，，MS，NMR，X-ray)结合化学反应的方法阐述了其中15个化合物的化学结构(化合物结构及名称参见Table1)，其中4个新化合物。新化合物的结构类型包括：2个Meleagrin类生物碱(1-2)和2个Roquefortine类生物碱(5．6)；其他的结构类型有色氨酸的衍生物2个(9，10)，甾醇类化合物3个(12．14)，苯的衍生物1个(11)，脑苷脂类化合物1个(15)。利用MTT法、SRB法，对分离获得的单体化合物的抗肿瘤活性进行了初步评价。从中筛选

5、出了7个活性化合物(1，2，3，5，7，13，14)。化合物3对A549细胞具有高强度抑制作用，IC50值为9．91．tM；对HL-60细胞具有中等强度抑两株深海来源真菌次级代谢产物及抗肿瘤活性的研究制作用，IC50值为33．6“M。化合物l、2、5和7对A549细胞具有中等强度抑制作用IC50值为62．5弘M、32．39M、84．59M和14．O／aM。化合物13和14对小鼠乳腺癌tsFT210细胞具有中等强度的细胞毒性，ICso值分别为89．5州and10．49M。本文从海洋微生物中共分离筛选出1

6、8株活性菌株；并从两株深海来源真菌的次级代谢产物中获得4个新的生物碱类化合物；并首次报道了5个化合物(新化合物1、2、5和己知化合物3、7)的抗肿瘤活性。上述研究提供了海洋天然产物的新结构，为抗肿瘤新药的筛选提供了活性化合物及活性菌株。关键词：深海海泥来源真菌，次级代谢产物，细胞毒，活性追踪分离，Meleagrin类生物碱Table1S咖ctureofcompounds鼙奴熙A，Melea9tinA，1MeteagrinB．ZMeleagdnC。3N多HN＼夕NNHRoquefortineF，5Roq

7、uefortineG．6HN＼夕NIEl·3-(1H．Imidazol·4·ylmethyiene)·6·(1H·RoquefortineH。7RoquefortlneC，8

8、ndol一3-yimettlyl)-2。5-pipera2jnedion。9Il两株深海来源真菌次级代谢产物及抗肿瘤活性的研究HOHON-(2-(1H-indol-3-y1)ethyl)acetamide。10chrysogine．11ergosterolperoxide．12Ho5．8-Epidioxy-24-me廿lyIch

9、oI豁‘啦，cerevisterol。14(4E，8E)-N-【(2’R．3’E)-2。-hydroxy·3’·22-dien·3B-01．13hexadecenoyl]-1·O-IB-D-glycopyranosyl-9-methyl-4，8-sphingadiene。15两株深海来源真菌次级代谢产物及抗肿瘤活性的研究StudiesoftheAntitumorConstituentsofSecondaryMetabolitesProducedbyTwo