食物中膳食纤维的测定

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1、膳食纤维的测定方法酶-重量法1.原理：样品分别用α-淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖苷酶进行酶解消化以去除蛋白质和可消化的淀粉。总膳食纤维（TDF）是先酶解，然后用乙醇沉淀，再将沉淀物过滤，将TDF残渣用乙醇和丙酮冲洗，干燥称重。不溶性和可溶性膳食纤维（IDF和SDF）是酶解后将IDF过滤，过滤后的残渣用热水冲洗，经干燥后称重。SDF是将上述滤出液用4倍量的95%乙醇沉淀，然后再过滤，干燥，称重。TDF、IDF和SDF量通过蛋白质、灰分含量进行校正。2.适用范围AOAC991.43本方法适用于各类植物性食物和保健食品。

2、3.仪器3.1烧杯：400或600ml高脚型。3.2过滤用坩埚：玻料滤板，美国试验和材料学会（ASTM）40-60μm，Pyrex60ml（CorningNo.36060buchner，或同等的）。如下处理：（1）在灰化炉525℃灰化过夜。炉温降至130℃以下取出坩埚。（2）用真空装置移出硅藻土和灰质。（3）室温下用2%清洗溶液浸泡1小时。（4）用水和去离子水冲洗坩埚；然后用15ml丙酮冲洗然后风干。（5）在干燥的坩埚中加0.5g硅藻土，在130℃烘干恒重。（6）在干燥器中冷却1小时，记录坩埚加硅藻土重量，精

3、确至0.1mg。3.3真空装置：（1）真空泵或抽气机作为控制装置。（2）1L的厚壁抽滤瓶。（3）与抽滤瓶相配套的橡皮圈。3.4振荡水浴箱：（1）自动控温使温度能保持在98±2℃。（2）恒温控制在60℃。3.5天平：分析级，精确至±0.1mg。3.6马福炉：温度控制在525±5℃。3.7干燥箱：温度控制在105和130±3℃。3.8干燥器：用二氧化硅或同等的干燥剂。干燥剂两周一次在130℃烘干过夜。3.9PH计：注意温控，用pH4.0、7.0和10.0缓冲液标化。3.10移液管及套头：容量100μl和5ml。3

4、.11分配器或量筒：（1）15±0.5ml，供分配78%的乙醇，95%的乙醇以及丙酮。（2）40±0.5ml，供分配缓冲液。3.12.磁力搅拌器和搅拌棒。4.试剂全过程使用去离子水，试剂不加说明均为分析纯试剂4.1乙醇溶液：（1）85%：加895ml95%乙醇在1L量筒中，用水稀释至刻度。（2）78%：加821ml95%乙醇在1L量筒中，用水稀释至刻度。4.2丙酮：4.3供分析用酶：在0-5℃下储存。（1）热稳定α-淀粉酶溶液：Cat.No.A3306，SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO

5、63178，或Termamyl300L，Cat.No.361-6282，Novo-Nordisk，Bagsvaerd，Denmark，或等效的酶。（2）蛋白酶：Cat.No.P3910，SigmaChemicalCo.，或等效的。当天用MES/TRIS缓冲液中现配50mg/ml酶溶液。（3）淀粉葡糖苷酶溶液：Cat.No.AMGA9913，SigmaChemicalCo.，或等效的。4.4硅藻土：酸洗（Celite545AW，No.C8656，SigmaChemicalCo.，或等效的）。4.5洗涤液：两者挑

6、一。（1）铬酸：120g重铬酸钠Na2Cr2O7·2H2O，1000ml蒸馏水和1600ml浓硫酸。（2）实验室用液体清洁剂，预备急需清洗的（Micro，InternationalProductsCorp.，Trenton，NJ08016，或等效的）。用水配制2%溶液。4.6MES-TRIS缓冲液：0.05mol/L，温度在24℃时pH值为8.2。（1）MES：2-（N-吗啉代）磺酸基乙烷（No.M-8250，SigmaChemicalCo.或等效的）。（2）TRIS：三羟（羟甲基）氨基甲烷（No.T-150

7、3，SigmaChemicalCo.或等效的）。在1.7L的蒸馏水中溶解19.52gMES和12.2gTRIS，用6mol/LNaOH调pH到8.2，用水定容至2L。（注意：24℃时的pH为8.2，但是，如果缓冲液温度在20℃，pH就为8.3，如果温度在28℃，pH为8.1。为了使温度在20-28℃之间，需根据温度调整pH值。）4.7盐酸溶液：0.561mol//L，加93.5ml6mol/L盐酸到700ml水中，用水定容至1L。5.操作方法5.1.样品制备：（1）固体样品：如果样品粒度＞0.5mm，研磨后过

8、0.3-0.5mm（40-60目）筛。（2）高脂肪样品：如果脂肪含量＞10%，用石油醚去脂。每克样品用25ml，每次提取完静置一会儿再小心将烧杯倾斜，慢慢将石油醚倒出，共洗三次。（3）高碳水化合物样品：如果样品干重含糖＞50%，用85%乙醇去除糖份，每克样品每次10ml，共洗三次轻轻倒出，然后在40℃烘箱中不时翻搅干燥过夜，并研磨过0.5mm筛。5.2.样品消化（1）准确称取双份1.000±0.00