常用培养基配制

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1、常用培养基LB培养基/升终1X浓度胰蛋白丿冻10g1.0%(w/v)酵母抽提物5g0.5%(w/v)NaCl10g1.0%(w/v)H2O至1升调节pH值至7.0低盐LB培养基/升终1X浓度胰蛋白豚10g1.0%(w/v)酵母抽提物5g0.5%(w/v)NaCl10g0.5%(w/v)IhO至1升调节pH值至7.0TerrificBroth培养基/升终1X浓度胰蛋白豚12g1.2%(w/v)酵母抽提物24g2.4%(w/v)甘油4g0.4%(w/v)加H20至900ml灭菌,冷却至60°C后加入100

2、ml过滤灭菌的10XTB磷酸盐(0.17MKH2P04,0.72MK2HPO4)SOB培养基/升终1X浓度胰蛋白月东20g2.0%(w/v)酵母抽提物5g0.5%(w/v)NaCl0.5g0.05%(w/v)250mMKC110ml2.5mMH20至900ml调节pH侑至7.0,加H2O至990ml灭菌、冷却至室温。使用前加入10ml灭菌的1MMgCL溶液10mMSOC培养基SOB培养基(1升)加入20ml过滤灭菌的1M葡萄糖M9基本培养基/升终1X浓度5XM9salts200ml灭菌H20至1升1M

3、MgSOt1ml1mM20%葡萄糖10ml0.2(w/v)1MCaCl20.1ml0.1mM5XM9Salts/升终1X浓度Na2HP04x7H2064g47.8mMKH2PO415g22mMNaCl2.5g8.6mMNHi5g18.7mM添加剂/升终1X浓度抗生素(如果需要)氨节青霉素50pig/ml氯霉素20Ag/ml卡那霉素30M-g/ml四环素12Pig/ml半乳糖昔(如果需要)X-Gal20Ag/mlIPTG0.1mM培养基含有琼脂或琼脂糖琼脂(平板)15g1.5%(w/v)琼脂(软性琼脂)

4、7g0.7%(w/v)琼脂糖(平板)15g1.5%(w/v)琼脂糖(软性琼脂糖)7g0.7%(w/v)参考文献1・Atlas,R.M・,HandbookofMicrobiologicalMedia,secondedition,Ed.Parks,L.C.,CRCPress,N.Y.,1997.2.Sambrook,J.,etal.,MolecularCloning:ALaboratoryManual,secondedition,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSp

5、ringHarbor,NY,Al.2-A2.12,2001.常用储存液10M醋酸钱醋酸鞍385.4gII20至500ml1MCaCl2CaC12x6H2O219.1gH2O至1升100XDenhardt溶液终浓度Ficoll40010g0.02%(w/v)聚乙烯毗咯烷酮10g0.02%(w/v)牛血清白蛋白10g0.02%(w/v)H>0至500ml过滤灭菌后分装(25ml),-20°C保存0.5MEDTA(乙二胺四乙酸)(pH&0)Na2EDTAx2H2O186.1gH.O至700ml10MNaOH

6、(~50ml)调节pH值至8.0H20至1升10mg/ml漠化乙锭浣化乙锭0.2g出0至20ml充分混匀后4°C黑暗保存警告:漠化乙锭是一•种突变剂。使用漠化乙锭溶液时需带手套;称量其粉末时需带血具。1MKC1KC174.6gH20至1升1MMgCl2MgC12x6H2020.3gH20至100ml1MMgSO4MgS0,x7出024.6gH20至100ml5MNaClNaCl292.2gH20至1升10MNaOHNaOH400.0gFLO至1升1MTris-HCl[三轻甲基氨基甲烷盐酸盐]Triba

7、se121.1gH.O至800ml川于浓缩的HC1调节至所需的pH值混合后加氏0至1升3M醋酸钠(pH5.2或7.0)(2)醋酸钠x3H20401.1gH2O至800ml用醋酸调节pH值至7.0或用冰醋酸调节pH值5.2H20至1升参考文献1.Atlas,R.M・,HandbookofMicrobiologicalMedia,secondedition,Ed.Parks,L.C.,CRCPress,N.Y.,1997.2.Sambrook,J・,eta1・,MolecularCloning:ALabo

8、ratoryManual,secondedition,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,Al.2-A2.12,2001.常用缓冲液10X磷酸盐缓冲液(储存液)(PBS)/升终1X浓度NaCl80.0g137mMKC12.0g2.7mMNa,HP0i14.4g100mMKH2PO42.7g2mMII2O至800mlHC1至pH7.4H.O至1升20XSSC/升终1X浓度NaCl175.3

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