葡萄糖标准曲线

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1、1DNSDNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝棊水杨酸(DNS)与还原糖发生氧化还原反应，生成3■氨基・5■硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，川比色法测定还原糖含量的。因其显色的深浅只与糖类游离出还原某团的数量冇关，而对还原糖的种类没冇选择性，故DNS方法适合用在多糖(如纤维素、半纤维素和淀粉等)水解产生的多种还原糖体系中。2试剂制备将6.3克DNS和262ml2mol/L氢氧化钠，加到500ml含冇182克酒石酸钾钠的热水溶液中，再加上

2、5克重苯酚和5克亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加水定容到1000ml,即制成3,5--硝基水杨酸试剂，贮于棕色瓶屮备用。3标准曲线分别取葡萄糊标准液(1mg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于15ml试管中，用蒸馆水补足至1.0ml,分别准确加入DNS试剂2ml,沸水浴加热2min,流水冷却,用水补足到15ml刻度。在540nm波长下测定吸光度。样品测定样詁液适当稀释，使糖浓度为0.1-1.0mg/ml,収稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中,加DNS试剂2.0ml,沸水煮沸2min

3、,冷却后用水补足到15ml刻度,在540nm波长下测定吸光度。从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数。求出样品中糖含量。二实验原理:在门0H和丙三密存在下，3,5-二硝基水杨酸（DXS）与还原粧共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH诚性濬滋中此化合物呈桔红色，在540nm»长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原粧的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含粧量。+还原糟(DNS)黄色（3-M基一5—码基水杨酸）？桔红色三.试剂和器材（1）lmg.ml葡萄粧标准洛存准确称取干燥恒重的葡萄糖100吨

4、，加少量蒸憎水溶解后，叹蒸锢水定容至100ml,即含葡萄械为1-Omgmlo（2）3.5-Z硝基水畅酸试剂：称取6.3g3,5-二硝基水杨酸并虽取262ml2molLNaOH加到酒石酸押纳的热溶液中（182e酒石酸押纳溶于500边水中八再加兴结晶酚和兴亚硫酸氢钠溶于其中，损拌溶解，冷却后定容到1000讪贮于棕色瓶中。（3）砌-碘化钾溶港:称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸憾水中。（4）6NNaOH:称収120gNaOH滚于500ml蒸tg水中。（5）0.1%酚酎指示剂。（6）6molLHCl>§^取

5、8支15mmx180mm试管，按下表加入l.Omgml葡萄糖标准滋和蒸馆水。管号01245678葡萄糠标准液（ml）00.20.40.60.S1.01.21.41.6熬僭水5D2.01.S1.61.41.21.00.80.60.4水杨酸溶液（凶）1.51.51.51.51.51.51.51.51.5葡萄糠含重（mg）00.20.40.60.S1.01.21.41.6将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5讪小取出后立即用冷水冷却到室温,再向每管加入21.5ml蒸惕水，摇匀。A=540nm处测走吸光度以葡萄械含量

6、（吨）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。五，结果处理按下式计算出样品中还原糠和总粧的百分含量：还原踴（以葡萄櫃计）%=-^1x100znxlOOO总糖（以葡萄糖计）％=年右k稀释倍数X0.9x100otxIOOO式中：C—原粧或总糖提取液的浓度，mgml；Y—W原粧或总糠提取液的总体积，ml；m—样品重量，g;100mg换算成g的系数。葡粧糖浓度（mg/ml）OD

7、0.2840.3850.4910.571OD/A葡粧粧浓Jgmg/mlOD值OD杲opticaldensity（光密度〉的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度，杲检测方法里的专有名词，检测单位用OD值表示，10D=1og（1/trans）,其中trans为检测物的透光值。光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定浪长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。•••••・%•PH()」M柠檬酸/ml0.1M柠檬酸钠/mlpH0.1M柠檬酸/ml0.1M柠檬酸/讷/ml]3.()18.6

8、1.45.()8.211.83.217.22.85.27.312.73.416.04.05.46.413.63.614.95」5.65.514.53.814.06.05.84.715.34.013.16.96.03.816.24.212.37.76.22.817.24.411.48.66.42.01&04.610.39.76.61.418.64.89.210.8C6H8O7H2O分了虽=210.140」M溶液含21.0®Na3