日本血吸虫成虫抗原筛选、鉴定与无细胞体系表达

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1、浙江省医学科学院硕士学位论文缩略词表^●‘J．japonicumSAWPERIgG2一DETCADTTEDTAIPGSDSTrisPAGETEMEDPVDFTBSBCIPNBTAPⅣ队LDITOFMSDaPMFDIGEPCRORFDEPCSPAPBSMESBSAPEGNHSEDCICDMPSehistosoma／aponicumSolubleadultwormproteinEndoplasticreticulumImmunoglobulinG2dimensionalelectrophoresisTrichloroaceticacidDithiothreitolEthylenediami

2、netetraaceticacidImmobilizedpHgradientSodiumdodecylsulfateTris(Hydroxymethyl)aminomethanePolyacrylamideGelElectrophoresisTetramethylethylenediaminePolyvinylideneFluorideTris(Hydroxymethyl)aminomethanebufferedsaline日本血吸虫成虫可溶性蛋白质内质网免疫球蛋白G二维电泳三氯乙酸二硫苏糖醇乙二胺四乙酸固相pH梯度十二烷基硫酸钠三羟甲基氨基甲烷聚丙烯酰胺凝胶电泳四甲基乙二胺聚偏氟乙稀

3、Tris缓冲液5_Bromo-4删0ro-3-Ind。lylPhosphate蒜4-詹。3。吲哚基磷Nitrobluetetrazolium四唑硝基蓝Alkalinephosphatase碱性磷酸酶yatrix：AsslstedLaserDesorp‘ion基质辅助激光解吸电离lomzation—‘‘—’⋯’’’’’’’’。。’‘。”。‘7’⋯TimeOfFlight飞行时间Massspectrometry质谱dalton道尔顿(质量单位)PeptideMassFingerprint肽质量指纹谱Differentialgelelectrophoresis差异凝胶电泳Polymerase

4、chainreaction聚合酶链式反应Openreadingframe开放阅读架Diethylpyrocarbonate焦碳酸二乙酯StaphylococcalproteinA金黄色葡萄球菌蛋白PhosphateBufferedSaline磷酸盐缓冲液2一(4-Morpholino)ethanesulfonicacid2．吗啉Z．磺酸Bovineserumalbumin牛血清白蛋白Polyethyleneglycol聚乙二醇N—HydroxysuccinimideN．羟基丁二酰亚胺N·(3一Dimethylaminopropyl)·N’一ethylcar1·(3一二甲氨基丙基)-3一

5、bodiimide乙基碳二亚胺Immunecomplex免疫复合物Dimethylpimelimidate二甲基庚二酰亚胺浙江省医学科学院硕士学位论文中文摘要血吸虫病仍然是全球危害最为严重的热带病之一。我国经过50多年积极防治，感染率和感染度均已降至较低水平，从人粪便样本中查找虫卵等病原学查病方法不仅费时费力，并且敏感性低，已不再适用于大规模的人群调查。血清免疫学诊断方法具有简易、快速、灵敏等优点，己在全国血吸虫病查治病中起重要作用。目前现场应用的免疫诊断方法均采用虫源性粗抗原检测抗体，虽然敏感性高，但与其它吸虫存在交叉反应，并且虫源性抗原还存在来源和标准化困难等问题。血吸虫基因组和蛋

6、白质组研究积累的庞大信息资料，加上免疫蛋白质组学技术的快速发展，为发现日本血吸虫特异性诊断抗原带来新的生机。目的一、应用免疫蛋白质组学技术整体研究日本血吸虫成虫可溶性蛋白质中全套抗原，获得具有诊断价值的抗原蛋白质，以期解决血吸虫病免疫诊断中抗原特异性问题。二、创建日本血吸虫抗原蛋白质的体外麦胚无细胞体系表达方法，以期获得保持良好抗原性的重组蛋白，解决日本血吸虫病诊断抗原的来源和标准化难等问题。方法从人工感染日本血吸虫的家兔体内收集成虫，用PBS漂洗后在冰浴上研磨成匀浆、超声粉碎，然后低温高速离心制备血吸虫成虫可溶性蛋白质(Solubleadultwormprotein，SAWP)。用双

7、向凝胶电泳(2．DE)分离蛋白质，每样本做3块平行2-DE胶，一块胶用于硝酸银染色，两块胶用于转膜作Westernblot检测。两张转印膜用5％脱脂奶粉封闭后，分别与健康兔IgG和感染兔IgG孵育，以AP标记的抗兔IgG多抗为二抗，用NBT-BCIP进行显色。选出膜上的阳性反应点，在染色胶找匹配的抗原蛋白质点。胶上的抗原蛋白点经挖点、脱色和胰蛋白酶消化后进行MALDI．TOF／TOF质谱鉴定，并通过搜数据库，获得抗原蛋白质的相关信息资料。本研究