日本血吸虫病诊断抗原的筛选与其抗原性鉴定

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1、中山大学硕

2、

3、学位沦艾只本血吸虫病睦断抗呶的筛选及苴扎棘什咎定本血吸虫序列同源的序列(含EST)有18条，与其它物种已知序列同源的序列有4条，未发现同源序列的有8条。把这些序列进行电子延伸，其中13条序列获得延伸(>50bp)。对延伸后的序列进行相似性检索，发现与已知血吸虫序列同源的序列增加到19条，增加了序列19；与其它物种已知序列同源的序列还是4条；未发现同源序列减少到7条。2．2对15条含有血吸虫特异性eDNA序列的阳性噬菌斑进行复筛，挑选出其中一个阳性反应最强的噬菌斑进行深入研究。经序列比对发现，挑选出的14号噬菌斑插入的eDNA片段与已知序列(AY222893．1)相同，且相似性为

4、100％，其中包含一个完整血吸虫毛蚴相关蛋白基因，编码蛋白的分子量为13kDa，为此将基因命名为SjMPl3基因。3．sjuPl3的识别、克隆、重组表达及其抗原性鉴定结果3．1成功扩增出了sjMPl3；目的片段与T-载体连接后，经提取质粒，PCR、双酶切和DNA测序鉴定，确定目的片段与T-载体连接成功；将pET28a-sjMPl3连接产物进行PCR，双酶切和DNA测序鉴定，确定重组质粒pET28a-SjMPl3也成功构建；重组质粒pET28a-SjMPl3经IPTG诱导后表达了重组蛋白，经SDS—PAGE显示与理论预测的融合蛋白分子量(SjMPl313kDa+担体蛋白4．1kDa=17．1k

5、Da)偏大，约23kDa。且该条带町被血吸虫病人血清识别，提示重组表达的蛋白具有抗原性。3．2重组SjMPl3的抗原性研究：采用重组SjMPl3作抗原用于间接ELISA检测，28份血吸虫患者血清均为阳性，15份正常人血清均为阴性，20份华支睾吸虫感染者血清也均为阴性，但检测20例乙肝感染者血清，出现6份阳性，假阳性率为30％。采用SEA作对照，28份血吸虫患者血清均为阳性，15份正常人血清均为阴性，20份华支睾吸虫感染者血清出现2份阳性(假阳性率10％)，20例乙肝感染者血清中也出现6份阳性(假阳性率为30％)。中山大学硕十学位论文日本血吸虫病硷断抗原的筛选及其抗原性鉴定研究结论采用免疫学筛

6、选、PCR技术及生物信息学方法，从日本血吸虫虫卵eDNA文库中发现了一批具有潜在研究价值的血吸虫特异性抗原序列，其中sjMPi3为毛蚴相关蛋白基因，经过构建原核表达载体pET28a-SjMPl3，成功表达了re-SjMPl3，Westernblot和ELlSA检测显示re-SjMPl3具有与SEA相似的敏感性，且特异性高于SEA，提示re-SjMPl3是一个理想的血吸虫病免疫诊断抗原分子，值得进一步的研究开发。关键词：日本血吸虫；eDNA文库；免疫学筛选；PcR；生物信息学分析；SjMPl3；重组表达；抗原性．V中山大学硕士学位论文日本血吸虫病诊断抗原豹筛选及其抗原性鉴定Immunoscre

7、eningofthenovelantigensfordiagnosisofschistosomiasisandidentificationofitsantigenicityMajor：PathogenBiologyMasterCandidate：WangLiSupervisor：Prof．WuZhongdaoABSTRACTSchistosomiasisjaponicaisstilloneofthekeypreventingandcontrollinginfectiousdiseaseinourcountry．Atpresent,wepreventschistomsomiasismainly

8、throughthecomprehensivemeasurement(chemotherapycombinedwithothermethods)．Diagnostictechniqueisthekeytechniqueformasschemotherapyandevaluatingtheeffeciencyofschistosomiasiscontr01．Themainlaboratorydiagnosisforschistomiasisarcbystoolexaminationandserologyexamination．Althoughthespecificityofstoolexami

9、nationis100％，thesensitivityislower,especiallyahighfalsepositiveratioforlowerepidemicareaorlowerdensityofinfection．Theimmunologyexaminationhasahighersensitivityandiseasytooperate，SOit’Sappliedwidelyasanauxil