人外周血间充质干细胞向肝样细胞诱导分化实验的研究

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1、徐州医学院硕士学位论文缩略词表Abbreviation缩略词英文全称中文全称AFPα-Fetoprotein甲胎蛋白ALBAlbumin白蛋白BSABovineserumalbumin牛血清白蛋白cDNAComplementaryDNA互补DNACFU-FColonyformingunit-fibroblast成纤维细胞集落形成单位CocktailHumanmesenchymalstemcell人间充质干细胞富集试剂enrichmentcocktailDNADeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸dNTPDeoxynucleosidetriphosphate脱氧核苷三磷酸EDT

2、AEthylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸ESEmbryonicstemcells胚胎干细胞FACSFluorescence-activatedcellsorter流式细胞仪FBSFetalbovineserum胎牛血清FGF-4Fibroblastgrowthfactor-4成纤维细胞生长因子-4FITCFluoresceinisothiocyanate异硫氰酸荧光素G-CSFGranulocyte-colonystimulatingfactor粒细胞集落刺激因子HGFHepatocytegrowthfactor肝细胞生长因子HMHepatocytemed

3、ium肝细胞培养基IGF-IInsulin-likegrowthfactor-I胰岛素样生长因子ITSInsulintransferrinselenium胰岛素铁硒传递蛋白L-GluL-GlutamineL-谷氨酰胺1徐州医学院硕士学位论文MNCsMonocyticcells单个核细胞MSCsMesenchymalstemcells间充质干细胞ODOpiticaldensity吸光度OSMOncostatinM抑瘤素MPBSPhosphatebufferedsolution磷酸盐缓冲液PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟RBITCRhodamine

4、Bisothiocyanate罗丹明RT-PCRReal-timepolymerasechainreaction实时定量聚合酶链反应2徐州医学院硕士学位论文论文独创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示了谢意。作者签名：日期：200年月日论文使用授权声明本人完全了解徐州医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、

5、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：导师签名：日期：200年月日徐州医学院硕士学位论文论文审阅认定书研究生在规定的学习年限内，按照研究生培养方案的要求，完成了研究生课程的学习，成绩合格；在我的指导下完成本学位论文，经审阅，论文中的观点、数据、表述和结构为我所认同，论文撰写格式符合学校的相关规定，同意将本论文作为学位申请论文送专家评审。导师签名：日期：200年月日徐州医学院硕士学位论文人外周血间充质干细胞向肝样细胞诱导分化的实验研究中文摘要目的探讨人外周血来源的间充质干细胞（MSCs）的体外分离扩增、培养生长以及诱导分化成有功能的肝样细胞的可行性。方法抽取经粒

6、细胞集落刺激因子（G-CSF）充分动员及未经动员的成人外周®血15-55ml，应用密度梯度离心法及使用特殊的RosetteSepHumanMesenchymalStemCellEnrichmentCocktail试剂，分离外周血中的MSCs，贴壁纯化扩增。实验中发现G-CSF动员过的外周血中造血系来源细胞过多，最终选用将未动员外周血中得到的MSCs进行表型鉴定，并在HGF、FGF-4和OSM诱导下分化成为肝样细胞。使用免疫荧光染色、Westernblot、RT-PCR、电镜等方法检测分析肝样细胞的功能和诱导分化能力。结果在经G-CSF充分动员的外周血中可以密度梯度离心法分离获得MSCs，6

7、数目约为3³10，但造血系细胞过多，影响培养结果。在未经动员的成人静脉血®中，应用RosetteSepHumanMesenchymalStemCellEnrichmentCocktail分离可以6获得MSCs，数目约为0.7-0.9³10，并通过流式细胞仪检测细胞表面抗原进一步证实。所得细胞经过贴壁纯化扩增和诱导分化，利用光镜观察细胞形态、免疫荧光标记检测细胞对于ALB及AFP的表达、Westernblot检测蛋白水平上