脂肪间充质干细胞向软骨细胞诱导分化的实验研究

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1、佳木斯大学硕士学位论文Y93301．‘论文题目：脂肪间充质干细胞向软骨细胞诱导分化的实验研究研究生：宋仁刚专业：口腔临床医学指导教师：刘树发协助指导教师：曹谊林：崔磊甲．位：佳木斯大学口腔医学院学位：上海第二医科大学九院单位：上海组织工程研究开发中心学习期限：2002年9月至2005年7月学位授了单位：伴木斯大学学术诚信承诺本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得佳木斯大学

2、或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。六／1，f签名乏釜垒型!日期：z!!兰：篁：!兰关于论文使用授权的说明本人完全了解佳水斯大学订关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被台阅和借阅；学校可以公布论义的全部或部分内容，可以采刖影印、缩印或其他复制手段保存论文。(保密的论文在解密后应遵循此规定)签名：赢乙印1导师签名：率堑妖H期：2：!=[芏：2／佳本强大学2002级硕士学位论文⑧脂肪间充质干细胞向

3、软骨细胞诱导分化的实验研究中文摘要【目的】：研究人脂肪干细胞(humanAdipose—derivedStemCells，ADSCs)在体外单层培养条件下诱导为软骨细胞可行性；研究脂肪于细胞与脱钙骨复合物在三维诱导培养条件下，回植到裸鼠皮下环境中组织形成情况，为软骨组织工程临床应用提供初步实验和理论依据。【材料与方法】对脂肪抽吸物中分离的问质细胞进行体外培养诱导。实验在两种条件F进行，单层诱导培养和三维诱导培养(支架为脱钙骨)，每种实验条件各设诱导组和未诱导组，诱导组用含有T(；F一01、地塞米松等特定诱导培养

4、液进行诱导培养，对照组的培养液为含10％FBS的DMEM。每天光镜下观察单层诱导和未诱导的脂肪下细胞形态学的改变，培养二天后免疫组化、原位杂交和RT—PCR等方法检测胶原和蛋白多糖的体外表达情况；脂肪干细胞一脱钙骨复合物诱导实验组和未诱导对照组体外培养6天，叫植到裸鼠皮下，分别J‘2、4、6、8、10删耿材。f硼j切片免疫组化、MasSon’s、AljCiail’s染色进}J二f1"2蛆和蚩自多糖表达、分伯鉴定。【结果】未诱导的脂肪卜细胞s≯克隆性牛长，细胞形态呈民梭形；诱导后身ll胞逐渐呈i角形、多角形等软骨

5、细胞样形态。免疫组化、圬if_杂交娃求诱导后ADscS表达11·弘J1,2原，皿Ⅲ叫也观察到I、III型胶原发达；阱PcR讧E实诱导ADSCs农达aggrecan、11，皑胶原mRNA，同时表达I、Ill、X、Xl型胶原ml{XA，术见lX型胶原ml{XA表达；未诱导ADSCs不表达aggrecan、1I，弘胶原mRNA。：维诱导后州植皮卜J2、4、6、8、10删取材、切』J，实验绀免疫组化显小表达I、lI、IIl型胶躲；Masson’S、Alician’S染也町蛇利料内的JJ爻』糸分泌⋯：』盏，仃酸佳本斯大学

6、2002级碗士学位论文性粘多糖沉积，但组织学观察特征性的软骨组织结构形成不明显：对照组未见II型胶原及酸性粘多糖沉积。【结论】脂肪干细胞单层诱导培养条件下，能分泌软骨细胞特征性细胞外基质一lI型胶原、aggrecan等，脂肪干细胞可作为软骨组织工程种子细胞的重要来源：诱导后回植的细胞一脱钙骨复合物可表达特异的软骨基质～II型胶原和蛋白多糖，但软骨组织特征性结构形成不明显。【关键词】：组织工程脂肪干细胞诱导分化软骨细胞脱钙骨佳本颧大学2002级硕士学位论文⑧Abstract【Objective]：Tostudyt

7、hefeasibilityofhumanAdipose-derivedStemCellsADSCsinmonolayercultureinducedintochondmcytesasseedingcellsincartilagetissueengineering；Tostudythetissueformationaftertheinducedcell-DBMcomplexesimplantedintonudemicesubcutaneously．[Methodsl：ADSCswereMoatedbycollag

8、enasedigestionfromliposuctionaspirates．andculturedforexpansioninvitro．TGF--Bl(10ng／m11anddexamethasone(1X107Hml／L)wereappliedintheculturemediumtoinducetheADSCsjofpassageonetobechondrogenicdiffer