app分离培养、鉴定、分型及双价灭活苗免疫的研究

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1、摘要本文从珠江三角洲地区感染猪群进行猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及血清学定型，己分离到7株APP野毒株，经培养特性观察、“卫星”现象、CAMP试验及糖发酵、尿索酶试验均符合猪传染性胸膜肺炎放线杆菌生物学特性，在PCR鉴定中均可扩增出APPapxIVA基因大小约为442bp的特异核苷酸片段，动物试验表明7株APP分离菌株均具致病性，血清分型试验表明有3株为血清I型APP，2株为血清7型APP，血清3、4型各为l株。对珠江三角洲地区31个集约化猪场共450份血清进行IHA试验检测，结果显示APP血清抗体阳性率为58．4％，经血清分型鉴定表明该地区集约化猪场主

2、要流行的血清型为APP1型，其次为APP7型和APP3型。以2株强毒株为地方适用型灭活疫苗菌种，探索了灭活疫苗生产的最佳营养要索及培养环境，在各种最佳优化条件下培养出的APP菌液浓度可达菌数24亿／m1，经安全性试验、理化性状检测表明疫苗安全有效。对兔及猪进行免疫，其抗体消长规律显示油乳佐剂灭活苗比铝胶佐剂灭活苗的免疫源性好，适时进行二次免疫，会显著提高抗体的水平和有更长的保护期。攻毒试验表明二价灭活苗对两个型的APP都具有可靠保护。疫苗田闻试验表明免疫后猪群料肉比低、上市重高、上市日龄短，死亡率及残次率较低。显示制备的APP双价地方适用型灭活疫苗可在临床推广

3、应用。关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌血清分型灭活疫苗抗体消长规律Abstract7strainsofAPPfromdeltadistrictofZhuJiangwasisolatedandtheserotypewasdetermined，theexperiments&culturecharacter、satellitism、CAMPtest、sugarfermenttestandureasetestwasaccordofAPPbiologyfeature．442bpDNAfragment。ofAPPAPXIVAwasamplifiedbyvcg,theanimal

4、testshowsthatthe4strainsofAPPwerepathogenic，sero-typingtestshowsthat3strainswereserotypelI，2strainswereserotype7，onewasserotype3andtheotherwasserotype4IHAtestwasproceededin31intensivehogpensofdeltadistrictofZhuJiang，450serumsampleshavebeentested，theresultshowsthatthepositiverateofAP

5、Pantibodywas584％，and，theserotypingshowsthatthemainpreventedAPPserotypeis1．secondlyserotype7and3．Thebestnutritionandcultureconditionoftheproductionofinactivatedvaccinewasdeveloped，using2highvirulenceAPPstrainsasthestrainsforinactivatedvaccineTheconcentrationofthebacteriagrowintheopti

6、mizedconditioncanreach2．4biltion／m1．SafetytestandcheckingofphysicsandchemistryfeaturedemonstratedthatthevaccinesafeandeffectiveRabbitandswinewereimmune，theebbandflowruleshowsthatoilemulsionadjuvantinactivatedvaccinehavebetterimmunogenicitythanactivatedaluminaadjuvantvaccine，proceedt

7、hesecondlyimmuneintherighttimecanboosttheantibodylevelsignificantlyandhavealongerprotectedperiod．TheimmunityeffecttestshowsthatswinecanbepreventinfectionfromthetwoserotypeofAPPbyusingthebivalentvaccine．Fieldexperimentofthevaccineshowsthattheswinehavealowerfeed：meatrate，highermarketw

8、eight，shorteragecom