hiv1来源的慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染血管内皮祖细胞的实验的研究

《hiv1来源的慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染血管内皮祖细胞的实验的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、染血管内皮祖细胞的可行性和方法。方法：采用密度梯度离心法和贴壁细胞分离法相结合，分离和筛选出人脐带血内皮祖细胞，用EGM．2培养基培养、扩增，采用细胞免疫荧光染色和流式细胞仪检测内皮祖细胞表面标记CDl33、CD34、VEGFR．2的方法鉴定实验培养的内皮祖细胞。取生长活跃的EPCs，以HIV-1来源的慢病毒为载体，以绿色荧光蛋白(GFP)基因为目的基因转染EPCs。感染复数M01分别为：1：10，l：50，1：100，MTT法检测不同病毒滴度时细胞增殖情况，计算转染率；取1：50转染组与未转染的空白组进行对照，于转染后1．10天观察两组细胞增殖情况。用t检验、卡方检验、方差分

2、析等方法对实验结果进行统计学分析，尺O．05有统计学意义。结果：单个核细胞经EGM．2培养基培养一周后，即分化成CDl33、I①R和CD34阳性的EPCs。1：10转染和1：50转染后细胞增殖无明显影响，细胞显绿色荧光。1：10比率转染后48小时绿色荧光细胞比率仅(35．2士2．75)％；1：50比率转染后48小时荧光显微镜下观察转染率为(87．4土1．89)％，转染率高于1：10组(火O．05)。1：50转染后的细胞继续培养并与未转染组对照，显示两组细胞生长曲线无明显差异pO．05)。1：100比率转染后，细胞的增殖处于停滞状态，镜下可见细胞坏死形成碎片。结论：l、采用密国家

3、自然基金项目(项目号：30700876)l㈣57度梯度离心法和贴壁细胞分离法相结合，经EGM．2培养基培养扩增可从脐带血获得较高纯度和较大数量的EPCs；2、采用HIV．1来源的慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染标记血管内皮祖细胞是可行的；以MOI=1：50进行转染，对细胞生长影响小，转染效率高。关键词：血管内皮祖细胞；转染；慢病毒；绿色荧光蛋白ThestudyOfgreennuOrescentproteingenetransf．ectioninendothelialprOgenitOrCeUsmediatedbylentiVirusVectOrAbstract：objecti

4、Ve：Tbstudytheis01ation，culture，锄plificationandidentificationofendothelialprogenitorcell(EPCs)．Tbunderstandthefeasibilityandmethodsofgreenjfluorescentprotein(GFP)transfectioninendothelialprogenitorcellsbymediatedbyHIV-1lentiVimsVector．Methods：Endothelialprogenitorcellshan，ested劬mumbilicalcord

5、bloodwereis01atedbygradientdensitycentrimgationandCultllredinEGM-2medium．ThecellswereidentifiedbyCD133，CD34，VEGFR-2immunofluorescencestaining．DifferentconcentrationsoflentiViralvector(multiplic埘ofinfectionMOI：1：1O，1：50，1：1OO)wereusedtotransfectgreenfluorescentprotein(GFP)intoEPCs．Theefjficie

6、ncyofcelltransfectionwasassayedbydi行erentViraltitersinMTT．Thecellproliferationwasobservedin1O(1ays仃ansfected．statisticanalysiswastestedbyttestortestaIlalysisofV撕a11ceandChi-squaremethods．p

7、CsbypositiVeCDl33，KDRa【1dCD34staining．IthadnosignificantdifferenceincellpI．olif．erationbetweenMOI1：1OgroupandMOI1：50group．ARer48hourstransfeCted，GFP-positiVeratewas(35．2士2．75)％inMOI1：lOgroup，whichwassignificantlowerthaJlthatinMOIl：50group(87．4士1．89