猪繁殖与呼吸综合征病毒e基因重组质粒的免疫效果研究

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1、广西大学硕士学位论文猪繁殖与呼吸综合征病毒E基因重组质粒的免疫效果研究姓名：郭冬申请学位级别：硕士专业：预防兽医指导教师：罗廷荣20080603厂。西大掌硕士掌位论文猪繁殖与呼吸综合证病毒E基因—}组质粒免疫效果的研究缩写英文缩写对照表英文名称PRRSporcinereproductiveandrespiratorysyndromeAmpampicillinE．coliEscherichiacoliHRPhorseradishperoxidaseDNAdeoxyribonucleicaciddNTPdeoxy-ri

2、bonucleosidetriphosphateRT-PCRreversettranscriptionpolymerasechainreactionSeChdrpmLmL∥LbpODPBSsecondhourdayrevolutionsperminutelitermillilitermicroliterbasepairopticaldensityphosphate-bufferedsalineELISAenzyme—linkedimmunosorbentassaygORFgramopenreadingframeRN

3、aseribonucleaseEDTAEthylenediaminetetraacetaticacid7中文名称猪繁殖与呼吸综合征氨苄青霉素大肠杆菌辣根过氧化物酶脱氧核糖核酸三磷酸脱氧核(糖核)苷反转录多聚酶链式反应秒小时天蛾{食铵升毫升微升碱基对光密度磷酸盐缓冲液酶联免疫吸附试验克丌放阅读框核糖核酸酶乙二胺四乙酸广西大学学位论文原创性声明和学位论文使用授权说明学位论文原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是在导师指导下完成的，研究工作所取得的成果和相关知识产权属广嚣大学所有。除跫注明部分外，论文中不包含其绝人巴经发

4、表过蛉研究成果，也不包含本人为获得其它学位而使用过的内容。对本文的研究工作提供过重要帮助酶个人秘集体，均已在论文中翳确说翡并致谢。攀⋯：中学位论文使用授权说明醒年臼“秘／本人完全了解广嚣大学关于收集、保存、使爝学位论文豹规定，帮：本人保证不以其它单位为第～署名单位发表或使用本论文的研究内容：按照学校簧求提交学位论文的印蓐

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6、请选择发布时间。嗽器时发布口簿密后发奄(保密论文需涟明，并在解密后遵守此规定)论文作者签名：吲魄l翩撼辫蹭年多月妒猪'}殖与呼吸综合征病．IIE基因●}组质粒免疫效果的研究猪繁殖与呼吸综合征病毒E基因重组质粒免疫效果的研究摘要猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)是一种严重危害养猪业的传染病，主要引起母猪繁殖障碍和仔猪及生长猪呼吸系统疾病。PRRS病毒(PRRSV)E蛋白是主要的免疫原性蛋白，含有与病毒中和作用相关的表位，在免疫反应中起重要

7、作用。PRRSVE基因被认为是亚单位疫苗、重组活载体疫苗和DNA疫苗的首选基因。为了探讨PRRSVE基因的免疫原性，即研究其是否能刺激机体产生特异性抗体与中和抗体，本研究应用了本实验室构建的表达PRRSVE基因的真核表达质粒pIRES．E，经转化后，大量抽提质粒，并用质粒pIRES．E、空载体plRESneo、生理盐水和不同剂量的PRRS弱毒苗分别免疫家兔。另外，用PRRS病毒GXA株接种于长成单层的Marc．145细胞，待出现病变后，收获病毒，测其病毒的滴度(TCID50)。本研究挑取18只体重1．5-2．0kg

8、的雄性健康家兔，随机分5组，plRES-E、空载体plRESneo组各4只，分别注射质粒200pg／只；生理盐水组4只，注射1mL／只I，1／4头份PRRS弱毒苗组3只，注射疫苗0．5mL／只：1／2头份PRRS弱毒苗组3只，注射疫苗1mL／只，全部后腿肌肉注射，共免疫2次，首免与二免间隔2周。分别于首免前和首免后不同时间点采血，分离血清，用ELISA和中和试验进行特异性抗体和中和抗体的检测，结果表明，免疫plRES．E质粒组家兔均产生了抗PRRSVE蛋白的特异性抗体，并且有3只家兔检测到了中和抗体。猪繁殖与呼吸综

9、鬯吒正病毒E基因●}组质粒免疫效果的研究本研究用本实验室构建的PRRSVE基因的真核表达质粒plRES．E免疫家兔，不但诱导家兔产生了特异性抗E蛋白的抗体，而且产生了中和抗体，进一步验证了PRRSVE基因的免疫原性，并表明重组质粒plRES．E可诱导机体产生一定的免疫效力，为进一步研制PRRS新型疫苗奠定了基础。关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒E基因家兔酶联免