猪伪狂犬病毒taqman-mgb荧光定量pcr检测方法的

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1、中国农学通报2013,29(17):37-41ChineseAgriculturalScienceBulletin猪伪狂犬病毒Taqman-MGB荧光定量PCR检测方法的建立及应用1，21，21，21，21，2郑敏，毛凝，黄梅清，陈仕龙，陈少莺（1福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州350013；2福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福州350013）摘要：建立可区分猪伪狂犬野毒株及基因缺失疫苗株的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。根据猪伪狂犬病病毒gE基因序列，设计一对特异引物和探针，通过优化反应条件，建立了可区分猪伪狂犬野

2、毒株及基因缺失疫苗株的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法，同时验证该方法的特异性、敏感性、重复性，并对30份疑似病料进行临床检测。本研究所建立的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法灵敏度可达2.23×10拷贝/µL，比常规PCR检测方法高100倍；与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)均无交叉反应，具有高特异性；对30份疑似病料的TaqMan荧光定量PCR和普通PCR检测阳性率分别为40%和33%，两者符合率90%。该方法灵敏度高、特异性强、重复性好，

3、可同时检测大量样品，可适合于PRV的临床诊断和流行病学调查。关键词：猪伪狂犬病毒(PRV)；TaqMan-MGB；荧光定量PCR中图分类号：S852.65文献标志码：A论文编号：2012-3755EstablishmentandapplicationofTaqMan-MGBFluorescenceQuantitativePCRforDetectionofPseudorabiesVirus1，21，21，21，21，2ZhengMin，MaoNing，HuangMeiqing，ChenShilong，ChenShaoying(1Insti

4、tuteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine，FujianAcademyofAgriculturalSciences，Fuzhou350013;2FujianAnimalDiseasesControlTechnologyDevelopmentCenter，Fuzhou350013)Abstract:TheaimwastoestablishaReal-timeTaqMan-MGBfluorescencequantitativePCRfordistinguishingthewildstrainandg

5、ene-deletedvaccinestrainofPRV.ApairsofprimersandaTaqMan-MGBprobesweredesignedandsynthesizedaccordingtothenucleotidesequenceofthegEgeneofpseudorabiesvirus(PRV)availableinGenBank，andreal-timeTaqMan-MGBfluorescencequantitativePCRfordistinguishingthewildstrainandgene-deleted

6、vaccinestrainofPRVwasestablishedsuccessfullythroughoptimizingthereactioncondition.Simultaneously，thediagnosticspecificity，sensitivityandrepeatabilityoftheassayswereverifiedandthe30suspectedmaterialweredetectedbytheestablishedreal-timeTaqMan-MGBfluorescencequantitativePCR

7、.ItwasdemonstratedthattheestablishedTaqMan-MGBquantitativePCRassaycoulddetect2.23×10copies/µLofplasmidDNA.Itssensitivitywas100timeshigherthanthatofthegel-basedPCR，andhadnocrossreactionwithclassicalswinefevervirus(CSFV)，porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus(PRRSV

8、)，porcinecireovirustype2(PCV2)andporcineparvovirus(PPV).The30suspectedmaterialweredetectedbothbyTaqMan-