SYBR Green I荧光定量PCR检测猪伪狂犬病毒gE基因缺失病毒株方法的建立-论文.pdf

《SYBR Green I荧光定量PCR检测猪伪狂犬病毒gE基因缺失病毒株方法的建立-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第36卷第2期中国预防兽医学报Vo1．36．NO．22014年2月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineFeb．2014doi：10．3969~．issn．1008-0589．2014．02．08SYBRGreenI荧光定量PCR检测猪伪狂犬病毒gE基因缺失病毒株方法的建立吕素芳什，郭广君，计，李峰，魏凤，管宇t，张文通，丁壮，，沈志强，2(1．山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州256600；2．山东绿都生物科技有限公司，山东滨州256600；3．吉林大学

2、动物医学院，吉林长春130062)摘要：为建立一种快速、特异、敏感的方法检测伪狂犬病毒(PRV1gE基因缺失病毒株，本研究根据PRV野毒SA株的gm和gE基因序列设计引物，建立了SYBRGreenI实时定量PCR方法，并对反应条件进行优化，建立了检测PRVgE基因缺失病毒株的SYBRGreenI实时定量PCR方法，其灵敏度比传统PCR方法的灵敏度高100倍，前者可达17．5拷贝／gL，后者为1．75×10拷贝／ixL。该方法可以检测出PRV，但PCV2、PPV、CSFV、PRRSV均为阴性，具有良好的特异

3、性和重复性。该方法可以用于病原学监测、流行病学调查及定量研究。关键词：伪狂犬病毒；gE基因缺失病毒；实时定量聚合酶链反应中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：10080589(2014)020116．05DevelopmentofaSYBRGreenIreal-timePCRforthedetectionofgEgenedeletedPseudorabiesvirusLVSu—fang”，GUOGuang-jun，。十，LIFeng，WEIFeng，GUANYu，ZHANGWen-tong2，

4、DINGZhuang3，SHENZhi—qiang，。(1．ShandongBinzhouAnimalScience&VeterinaryMedicineInsitute，Binzhou256600，China；2．ShandongLvduBio—industryCo．，LTDBinzhou256600，China；3．CollegeofVeterinaryMedcine，JilinUniversity，Changchun130062，China)Abstract：Pseudorabiesvirus(PR

5、V)，atypicalalphaherpesvirus，isaneconomicallyimportantpathogenofswine．Inthepresentmarket，themainlyvaccinestrainofPRVisgEgenemutantinChina．Areal—timePCRassaybasedonSYBRGreen1wasestablishedfordetectionthegEgenedeletedPseudorabiesvirusstrain．Thesensitivityoft

6、hemethodwasupto17．5copies／ixLofthePRVDNA，whichwas100timeshigherthanthatofnormalPCR．Themethodhadnocrossingreactionwithporcineckcovirus2，porcineparvovirus，classicalswinefevervirusandporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus．Theestablishedassaycouldbeus

7、edforpathogenmonitoring，epidemiologicalsurveys．Keywords：Pseudorabiesvirus；gEdeletedvirus；real—timefluorescentPCR*Correspondingauthor；tEqualcontributors收稿日期：2013-06—14基金项目：山东省自然科学基金(ZR2012CQ012)；山东省技术创新项目(201220916006)；滨州市应用技术研究与开发专项(200706)十共同第一作者：吕素芳(198

8、2-)，女，江苏东海人，硕士研究生，从事动物基因工程疫苗和诊断技术方面研究；郭广君(1978-)，男，山东东平人，博士研究生，主要从事动物基因工程疫苗研究．通信作者：E-mail：bzshenzq@163．com第2期吕素芳，等．SYBRGreenI荧光定量PCR检测猪伪狂犬病毒gE基因缺失病毒株方法的建立117伪狂犬病(Pseudorabies，PR)是由属于疱疹病毒I提取试剂盒购北京百泰克生物技术有限公司。型的PR病毒(P