朱鹮脑内p物质的免疫组织化学定位

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1、512以科学发展观促进科技创新(下)—====================；================================一2农业部．食品动物禁用的兽药及其他化合物清单．中华人民共和国农业部公告(第193号)2002，43赵红琼，黄燕，陈杖榴，等．新疆地区奶牛子宫内膜炎病原菌的分离鉴定及其对抗茵药物的敏感性试验．中兽医医药杂志，2005，24(2)：16～184徐淑云，卞如廉，陈修主编．药理实验方法学(第三版)．北京：人民卫生出版社，20015肖培根．新编中药志(第一卷，第三卷)．北京：化学工业出版社，2001，126石钺，石任兵，陆

2、蕴如．我国药用金银花资源、化学成分及药理研究进展．白头翁兽药，2003，127黄泰康主编．常用中药成分与药理手册．北京：中国医药科技出版社，1994，48赵红琼．新疆地区奶牛子宫内膜炎病原茵的分离鉴定及其治疗中草药的筛选．新疆农业大学硕士学位论文．2005作者简介赵红琼，女。讲师，硕士。主要从事动物生理学和兽医药理学的教学和研究。电话：13139654866；E—mail：zhaohongqiong@sina．corn。简子健，教授，主要从事动物病理学研究。电话：0991—8762705；E—mail：ziiianiian2004@yahoo．corn．c

3、n0朱鹩脑内P物质的免疫组织化学定位①张学博1黄鑫欣1张信文2曾少举1孙颖郁1刘斌3左明雪11．北京师范大学生命科学学院，北京，100875；2．海南师范学院生物系，海口，571158；3．北京动物园，北京，100044摘要用免疫组织化学方法研究P物质(SP)在极危物种朱鹳脑内的分布，结合计算机图像分析仪检测免疫阳性细胞和末梢的灰度值。SP阳性细胞、纤维和终末分布如下：①听觉中枢有耳蜗核、上橄榄核、脑桥外侧丘系腹核、中脑背外侧核壳区、丘脑卵圆核壳区等；②发声核团有延髓舌下神经核、中脑背内侧核、中脑丘间核、丘脑背内侧核外侧部、原纹状体中间区腹部；③内分泌核团

4、有视前区前核、下丘脑外侧核，下丘脑腹内侧核等。结果表明：SP可能对朱鹳发声一听觉一内分泌下丘脑轴系统的生理活动有重要的调制作用。关键词生理学朱鹳P物质发声听觉中枢朱鹃为世界极危物种，自1981年在陕西省洋县被重新发现以来(Liu，1981)，目前已对其数量、分布、濒危状况、种群动态、生态习性、生长发育与行为、人工繁殖及保护等方面进行了大量的研究，但对其生理和解剖的研究较少(Fanetal，1999，Yamashina&Nakanishi，1983)，对其脑的结构等国内外尚无报道。P物质(substanceP，sP)是速激肽家族中的一员，是由n个氨基酸组成的

5、神经调质，并在机体的生理活动中起重要的功能，它可抑制或兴奋多种神经递质的释放，以参与多种生理功能的调制作用(Na．kantshi1991；Otsuka1993；Lin&Ju，1998)。本文在上述研究基础之上，采用免疫组织化学方法并结合计算机图像仪分析，对SP在朱鹛脑内的分布进行了观察和定位，为进一步了解这一极危物种提供形态①基金项目：国家自然科学基金资助项目(30360030，30370472，30270449)。第27分会场整合生理学——从分子到整体513一=======；=—=========；{==；======——================

6、=#学资料。一、材料和方法朱鹛汐)全脑由北京动物园(意外死亡1只)赠送；动物脑用于SP免疫组织化学实验和焦油紫染色。ABC复合物为(Avidin—Biotin—Complex)为美国Vector公司产品，用1：200，0．03％的Tritonx一100的O．1mol／L磷酸缓冲液稀释；SP免疫组织化学试剂分别用1：200的抗SP血清(SantaCruzCorp)(北京中山公司购置)。计算机图像分析系统为美国SPOT—II产品。朱鹃取脑，浸入4％多聚甲醛中固定和保存，并在30％蔗糖的0．1mo

7、／L磷酸缓冲液内(4℃)沉底后，矢状冰冻切片(40vim)，朱鹃

8、脑切片分成12套，收集于0．1mol／L磷酸缓冲液(pH=7．4)内。其中4套用作P物质免疫组化反应，2套作焦油紫染色，6套备用。SP免疫组织化学染色方法如下：①将切片分别置于1：200的SP血清中于室温下孵育3h；②Biotin标记的羊抗兔IgG血清1：200室温孵育2h；③ABC复合物内结合2～3h；④DAB(0．05％)和H：O：(0．03％)内呈色25rain。切片贴于涂有明胶的载片上，经脱水透明、封片。另2套切片用作焦油紫染色，用以定位SP免疫阳性神经纤维，终末或细胞在脑中的分布区域。朱鹃核团的定位和命名参考鸽、金丝雀脑立体定位图谱和张信文等以前

9、的工作(Zhang&Lan，1993，1994)为依据。对照实验用