不同龋敏感儿童菌斑中变异链球菌数量和菌群比例定量研究

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1、不同嶠敏感儿童菌斑中变异链球菌数量和菌群比例定量研究［摘要］目的比较不同齬敏感儿童口腔菌斑中变异链球菌数量及其在菌群中比例的差异。方法采集26名3〜4岁不同齬敏感的儿童牙面菌斑，运用TaqMan探针实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测有頻组和无嶠组儿童菌斑中变异链球菌和总菌数量，以及变异链球菌在总菌群中所占的比例，并对结果进行分析比较。结果有齬组和无舗组儿童每毫克菌斑中变异链球菌菌落数分别为1.33X105、1.16X103CFU•mg-1,二者间差异有统计学意义（P=0.033）；每毫克干重菌斑中总菌落数分别为7.17X1

2、07.1.01X108CFU•mg-1,二者间差异无统计学意义（P=0.418）；有齬组和无齬组变异链球菌在总菌中所占比例分别为0.0586和0.0186,二者间差异有统计学意义（P=0.008）。结论无嶠与患嶠儿童牙面总菌群数量差异无显著性，但患嶠儿童牙面菌斑中变异链球菌数量更多，在总菌群中所占比例更大。提示菌斑中变异链球菌与总菌的比例与儿童患嶠风险密切相关，可以作为评估齬易感性和预测鵠病发展趋势的新指标。［关键词］嶠齿；乳牙；牙菌斑；变异链球菌；实时荧光定量聚合酶链反应［中图分类号］R781.1［文献标志码］A［doi］1

3、0.7518/hxkq.2013.06.018乳牙頻是影响儿童口腔健康的主要疾病之一，变异链球菌(Streptococcusmutans,S.mutans)是与乳牙齬关系最密切的致犒菌之一。林焕彩等［1］研究发现高犒儿童变异链球菌检出率高于无頻儿童，菌斑致頻菌的种类越多，犒活跃性也就越高。支清蕙等［2］通过任意引物聚合酶链反应(arbitrarilyprimed-polymerasechainreaction,AP-PCR)法验证了上述结果，推断口腔中定植的变异链球菌是乳牙嶠高发的危险因素。流行病学调查表明：驕活跃性分布不均，

4、在发达国家学龄儿童中60%〜70%齬发生在20%人群［3］。另外美国公共卫生调查也显示：1/4的学龄儿童拥有3/4的頻齿［4］。以往文献［5-6］显示儿童頻病不均衡性与变异链球菌数量密切相关。近期研究［7］表明口腔菌群是个复杂的微生物群落，菌种的多样性和复杂性对鵠齿的发生起着更重要的作用，提示变异链球菌在总菌群中的比例能更好地反映驕齿发生是多因素综合作用的结果［8-10］o由此可见，儿童口腔中变异链球菌数量及与菌群比例的定量研究是了解頻齿高危人群和儿童頻病不均衡性的重要途径。本研究应用TaqMan探针实时荧光定量聚合酶链反应(

5、polymerasechainreaction,PCR)法对不同嶠敏感儿童菌斑样本进行检测，比较有轄和无嶠儿童牙菌斑中变异链球菌数量、总菌量以及变异链球菌在总菌群中所占比例的差异，为从细菌水平上对乳牙頻齿的发生进行预测和预防提供相关依据。1材料和方法1.1主要材料、试剂和仪器变异链球菌标准菌株Ingbritt（c）（首都医科大学微生物教研室提供），TaqManUniversalPCRMasterMix.ABI7500型定量PCR仪（AppliedBiosy-stems公司，美国），溶菌酶、核糖核酸酶A（Merck公司，德国），

6、杆菌肽（Amresco公司，美国），TYCMedium培养基（Idgplc公司，英国），QIAampDNAMiniKit试剂盒（Qiagen公司，德国），Micro-Modulyo冷冻干燥机（ThermoElectron公司，美国），BioNano超微量紫外可见分光光度计（ThermoScien-tific公司，德国）。1.2方法1.2.1研究对象随机抽取北京市海淀区某幼儿园小班学生26名，其中男14名，女12名。年龄3〜4岁，平均年龄（3.7±0.3）岁。抽样人群符合以下要求：采样前2周内未服用过抗生素类药物，除頻齿外无其他

7、口腔疾病及系统性疾病病史，采样前2h禁食，采样期间除儿童日常刷牙外无其他特殊口腔健康措施实施。本研究经北京大学生物医学伦理委员会批准，所有研究对象家长均知情同意。1.2.2口腔检查由1名口腔专业医师担任检查者，在幼儿园现场采集頻病临床数据。鵠病检查程序、器械和诊断标准依据WHO口腔健康调查基本方法(3版)。检查者经第三次全国口腔健康流行病学调查技术指导组成员培训，统一齬病检查方法和标准，标准一致性检验Kappa>0.8,项目检查前后检查者自身标准一致性检验Kappa>0.9o1名经培训的护士负责记录数据，1d内完成儿童口腔頻病

8、检查。记录齬失补牙面数(decayedmissingfilledsurfaces,dmfs)o根据dmfs将受检儿童分为无鵠组(dmfs=0)和有齬组(dmfsMl)o1.2.3样本采集及处理上午9：30-10：30采集菌斑样本，无菌挖匙刮取上颌乳磨牙颊侧完好牙面菌斑，转移至