myocilin蛋白对人眼小梁网细胞fn表达及细胞迁移与粘附的影响

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1、分类号：R775学校代码：10392学科专业码：100212学号：200901165福建医科大学硕士研究生毕业论文Myocilin蛋白对人眼小梁网细胞FN表达及细胞迁移与粘附的影响Effectofmyocilinonfibronectinexpressionandcelladhesionandmigrationinhumantrabecularmeshworkcells学位类型：医学硕士所在学院：第二临床医学院研究生：贺琴学科、专业：眼科学导师：吴瑜瑜教授研究起止日期：2010年09月至2011年10月答辩日期：2012年5月27日二○一二年

2、六月0万方数据1万方数据目录一、中文摘要……………………………………………………………………………………3二、英文摘要……………………………………………………………………………………4三、引言…………………………………………………………………………………………6四、第一部分、正常人眼小梁细胞的体外培养………………………………………………81.材料………………………………………………………………………………………82.方法………………………………………………………………………………………93.结果………………………………………………………………

3、………………………134.讨论………………………………………………………………………………………15第二部分、myocilin蛋白对小梁细胞表达FN及细胞粘附、迁移影响的研究………171.材料………………………………………………………………………………………172.方法………………………………………………………………………………………203.结果………………………………………………………………………………………244.讨论………………………………………………………………………………………29五、全文结论……………………………………………………

4、………………………………33六、参考文献……………………………………………………………………………………34七、英文缩写词表………………………………………………………………………………37八、致谢…………………………………………………………………………………………38九、综述…………………………………………………………………………………………39*本研究系福建省自然科学基金（2010J01148）资助2万方数据Myocilin蛋白对人眼小梁网细胞FN表达及细胞迁移与粘附的影响摘要目的在体外培养人眼小梁网细胞的基础上，研究myocilin蛋白对

5、人眼小梁网细胞纤维连接蛋白(fibronectin，FN)表达以及对小梁网细胞迁移、粘附功能的影响，探索myocilin蛋白与原发性开角型青光眼发病的关系。方法采用组织块培养法体外培养正常人眼小梁网细胞，并运用倒置显微镜观察、透射电镜和免疫细胞化学等方法对细胞进行鉴定。取传三代的小梁网细胞分别加入含重组myocilin蛋白终浓度为0ug/ml（对照组）、0.5ug/ml、1ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml的无血清培养基，继续培养24小时后，运用Westernblot、Elisa法分别检测小梁网细胞内及细胞培养液中F

6、N的表达水平；运用Transwell小室法、CCK-8法检测myocilin蛋白对小梁网细胞迁移、粘附的影响。结果1.成功建立人眼小梁网细胞体外培养体系，经鉴定确定为人眼小梁网细胞。2.Westernblot检测结果显示，在一定范围内，随myocilin蛋白浓度的增高小梁网细胞内FN表达呈下降趋势。3.Elisa法检测经浓度为0ug/ml、0.5ug/ml、1ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/mlmyocilin蛋白干预的各组细胞培养液中FN浓度为：0.5817±0.0959ug/ml、0.5572±0.0443ug/m

7、l、0.5868±0.0735ug/ml、0.5015±0.0472ug/ml、0.4263±0.0426ug/ml、0.2838±0.0972ug/ml。1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/mlmyocilin蛋白组与对照组的差异有统计学意义(P<0.05)，且此三组实验组组间比较存在显著性差异。4.Transwell小室法检测结果显示，实验组细胞迁移数较对照组少，且实验组与对照组的差异有统计学意义(P<0.05）。5.运用CCK-8法检测经浓度为0ug/ml、0.5ug/ml、1ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5u

8、g/mlmyocilin蛋白处理的各组细胞吸光度值的均值分别为0.1614±0.0061、0.1529±0.0139、0.1273±0.0172、0.1271±0.