基于基质固相分散萃取-高效液相色谱-串联质谱的植物激素分析

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1、中国科学技术大学博士学位论文万方数据基于基质固相分散萃取．高效液相色谱．串联质谱的植物激素分析作者姓名：学科专业：导师姓名：完成时间：王璐分析化学关亚风研究员二。一四年十月万方数据UniversityofScienceandTechnologyofChinaAdissertationfordoctor，SdegreeDeterminationofplanthormonesbymatrixsolid．．phasedispersion--highperformanceliquidchromatography_tandemmassspe

2、ctrometryAuthor’SName：Speciality：Supervisor：Finishedtime：LuWangAnalytica

3、ChemistryProf．YafengGuanOct10出，2014万方数据中国科学技术大学学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。除己特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何他人己经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：i童拯签字日期：—丝旦尘』生斗一中国科学技术大学学位论

4、文授权使用声明作为申请学位的条件之一，学位论文著作权拥有者授权中国科学技术大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权按有关规定向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文编入《中国学位论文全文数据库》等有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人提交的电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后也遵守此规定。导师签名：签字日期：翘i堂。IQ。三)万方数据摘要植物激素是小分子天然产物，在低浓度时就能够调节植物的生长和发育。精确测定植物激素的含量，

5、对深入研究其在生物合成、运输、代谢和分子调节机制中的作用日益重要。由于植物基质复杂，植物体中植物激素的含量极低，植物样品的前处理方法仍是制约痕量植物激素分析的一个技术瓶颈，并影响植物学研究。因此，发展高效的样品前处理技术，结合分离检测技术，建立高选择性、高灵敏度、高可靠性的植物激素定性定量分析方法，是推动植物学机理深入研究的关键。目前，植物激素的分析通常采用繁琐的样品前处理方法，一般包含过夜浸提、溶剂萃取、固相萃取净化或色谱净化、制备液相色谱纯化等多个步骤，方法萃取效率较低，耗时长(一般需要数天)。鉴于此，本论文致力于发展新型样品

6、前处理方法，结合色谱．质谱联用技术，实现植物样品中赤霉素、油菜素甾醇和细胞分裂素等重要植物激素的高灵敏、高选择分析，取得的主要研究成果如下：(1)将基质固相分散(MatrixSolid．PhaseDispersion，MSPD)萃取用于拟南芥中赤霉素的选择提取，并将其与液相色谱．串联质谱(LC．MS／MS)联用，建立了三种赤霉素(GAl，GA3，GA4)的定量分析方法。通过对样品前处理条件、色谱分离条件和质谱检测条件的优化，检测灵敏度达到1．1～4．1ng／g。用于三份拟南芥实际样品，检测出其中GAl，GA3和G～的含量分别为11

7、．20～15．14ng／g，1．15～1．53ng／g，2．08～3．43ng／g。方法具有操作简单、选择性好、回收率高等优点。(2)采用预装填固相萃取分散剂的方式，结合静态平衡萃取对基质固相分散萃取进行改进，并用于水稻样品中的痕量赤霉素的选择性提取。通过对静态平衡时间，样品与分散剂比例，分散剂材料以及洗脱溶剂的优化，减少了基质效应，获得了更高的提取效率。将其与LC—M3／MS联用分离分析八种赤霉素，检测限达到0．03～0．67ng／g。八种赤霉素在低添加浓度下回收率为46．6％～117．9％，RSD值在39．3％以下；在较高添加

8、浓度下，赤霉素的回收率分别在69．3％-122．5％(25ng／g)和85．7％～119．O％(35ng／g)，其RSD分别小于11．3％和4．6％。结果表明，预装填分散剂和静态平衡萃取能有效提高MSPD过程对痕量赤霉素的萃取效率，降低基质效应，是提高检测灵敏度的有效手段。(3)建立了一种串联MSPD．MAX．MCX样品前处理方法，对植物中痕量油菜素甾醇(Brassinosteroid，BRs)进行选择性提取和纯化。MSPD采用反相分散剂，能有效去除植物基质中的中性和疏水性干扰物；随后的串联SPE过万方数据摘要程能有效去除基质中的

9、可离子化的干扰物，进而降低对质谱检测的影响。由于MSPD和MAX—MCX过程采用同一种洗脱剂，因此，可以将两者串联实现提取纯化一步完成。该前处理方法完全避免了植物组织过夜溶剂浸提的步骤，将样品前处理时间由传统的数天缩短至几小时。在此基础上，结合LC