大豆抗原蛋白对仔猪肠道的致敏作用及elisa检测方法的建立

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1、万方数据AnhuiAgriculturalUniversityMasterDissertationIntestinalAllergizationandEstablishmentofELISADetectionMethodofSoybeanAntigenProteininPigletsPostgraduate．KOUYa．nanAdvisor：里!Q￡y臼辽』in=ji曼AcademicDegreeAppliedfor：垒4垒墨±星!Q!』鳖g￡i鱼坠!塑垦!星Major：g!i塾i堡垒!选!曼!i望i!型S曼i星旦

2、鱼曼ResearchField：进!亟坠垒碰￡!ini坌垦!旦i垒盟Q血Q垒卫鱼Ih曼!鲤曼业iQI鲤鱼Q!QgYInstitute：￡Q!!曼g星Q￡△塾i堡垒!S鱼i曼坠Q曼坌盟鱼：＆殳h卫Q!Q毅AnswerCommitteeChairman：June2014万方数据独创性声明．／／IrI／I／I么／／／I／／I厂／／／lU5／I／／13I／／／I／9／I／／／／17I／／II。／／／II／本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论

3、文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：避时间：如埤年6月弓日关于论文使用授权的说明本人完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意安徽农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后

4、应遵守此协议)研究生签名：燃时间：刎牟年易月3日第一导师签名：时间：∥。f午年多月≥日万方数据中文摘要大豆中的抗原蛋白能引起机体发生过敏反应，不仅威胁人类的健康，也给畜禽业造成巨大的经济损失。本试验通过高纯度的大豆抗原蛋白致敏仔猪，研究大豆抗原蛋白对仔猪肠道的致敏作用，同时建立一种仔猪大豆抗原蛋白血清抗体间接酶联免疫吸附反应(ELISA)的检测方法，以期为动物大豆抗原蛋白致敏提供临床诊断方法。大豆抗原蛋白对仔猪肠道的致敏作用。试验采取完全随机设计，将30头临床检查健康的21日龄断奶仔猪随机分为3个组，每组10头，分

5、别为对照组、大豆球蛋白(1lS)致敏组和B．伴大豆球蛋白(7S)致敏组。在仔猪21~27日龄与32～34日龄时，分别进行初次致敏和再次致敏。其中，llS和7S致敏组，在基础日粮中分别添加4％的11S蛋白和4％的7S蛋白(纯度分别为80％和85％)。在仔猪2l、28和35日龄时，用EDTA抗凝管进行前腔静脉采血，用于ELISA试剂盒测定血浆D．乳酸、二胺氧化酶和5．羟色胺含量水平；在仔猪35日龄时，进行皮肤致敏试验；在36日龄时，每组随机选择5头仔猪屠宰，取十二指肠近端、空肠近端、空肠中段、空肠远端、回肠远端各6cm

6、，用免疫组化方法测定分泌型IgA阳性表达分布及强弱。仔猪大豆抗原蛋白血清抗体间接ELISA检测方法的建立。试验分组及处理方法同上。在21、28和35日龄时，每天上午7：00,-,8：00对所有试验仔猪空腹采血，室温静置2h后，3000r·min-1离心10min，分离血清，并在35日龄时做皮肤致敏试验。采用棋盘滴定法确定最佳抗原包被质量浓度及血清稀释倍数，并对其他条件进行优化，建立检测血清大豆抗原蛋白11S、7S抗体的间接ELISA方法，确立待测血清判定标准，并对建立的ELISA方法进行重复性、准确性和敏感性检测。

7、试验结果如下：1．皮肤致敏试验后，所有致敏组仔猪11S和7S蛋白注射点皮肤反应均较明显，评判结果在“+”级以上，7S蛋白致敏组仔猪的反应尤为明显，评判结果达到“++”级以上，证明大豆抗原蛋白可使35日龄仔猪产生过敏反应。2．在28和35日龄时，大豆抗原蛋白致敏组仔猪血浆D．乳酸含量水平、二胺氧化酶活力和5．羟色胺含量水平与对照组相比显著升高(氏0．01)，结果表明血浆D．乳酸含量水平和二胺氧化酶活性与肠道损伤具有很强的相关性。对大豆抗原蛋白致敏仔猪血浆5．羟色胺含量进行检测，发现5．羟色胺在机体内随着日龄的增加呈先

8、低后高再低的趋势，肠道生理功能的强弱与血浆5．羟色胺含量变化有一定的关系。3．试验用免疫组化的方法，分别对仔猪的十二指肠、空肠近端、空肠中段、空肠远端和回肠远端的分泌型IgA阳性表达分布及强弱进行比较，发现空肠中段阳性分布和光密度值明显高于其他各试验组肠段，7S致敏组仔猪阳性表达强度尤为明显，其次万方数据是11S致敏组。小肠5段肠管中分泌型IgA阳性表达光密