载脂蛋白apoe修饰脂质体定向介导hsvtk自杀基因在肝癌细胞中的表达研究

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1、万方数据分类号：R735．7单位代码：10114密级：学号：20111010159载脂蛋白apoE修饰脂质体定向介导HSVtK自杀基因在肝癌细胞中的表达研究ConstructApoEModifiedLiposomesVectorandDetecttheExpressionofHSVtKSuicideGeneforTreatmentofHepatoceUularCarcinomainVitro研究生：指导教师：专业名称：研究方向：学位类型：所在学院：二。一四年三月十三日万方数据学位论文独创性声明IIIIIIIIIIII

2、MllllllIMlllllllll)lllllIY2660108本人卢明，所早交的学位论文系在导师指导下本文独立完成的研究成果。文中任何引JHj他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容朱包含法律意义上已属丁-他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已川丁J其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同忠对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以卜．责任和后果：l、交同学校授予的学位证h2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对冈不

3、当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。4、本人负责冈论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：耦旁日期：如I午年6月f6日学位论文版权使用授权书本人完全了解山两医科人!学有关保留、使川学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部I、J或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科人学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采川影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使J}{』学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山两医科

4、人!学。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：指导教师签名：日期：如忤年‘月心El日期：如【牛年6月C6曰(本声明的版权!}1山豳医科人学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使朋)万方数据目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1ABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5一月Ij吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．第一章实验材料⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7第二章实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12第三章实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．22第四章讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．33参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．38参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46攻读学位期间发表文章情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯．56个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57万方数据山两医科人学硕Ij学位论文载脂蛋白apoE修饰脂质体定向介导HSVtK自杀基因在肝癌细胞中的表达研究摘要目的将载脂蛋白apoE和普通脂质体lipoplexes偶联，构建一种具有肝细胞和肝癌细胞靶向性的基因治疗载体apoE—lipoplexes；使用pGenesil—l质粒，以EGFP基因作为报告基因，检测基因运载体apoE．1ipoplexes对肝细胞以及肝癌细胞的转染效率：构建pAFP—TK—IRES2一EGFP自杀基因载体质粒

7、；检测甲胎蛋A(AFP)启动子调控胸苷激酶(HSVtK)自杀基因在肝癌细胞中特异表达水平；评价HSVtK自杀基因对肝癌细胞的杀伤效果。方法制备普通阳离子脂质体(1ipoplexes)和阳离子脂质体载脂蛋白复合物(apoE—lipoplexes)；分别使用apoE．1ipoplexes和lipoplexes两种脂质体，将携带EGFP标记基因的pGenesil一1质粒转染HL一7702肝细胞、HUH一7肝癌细胞和HepG2肝癌细胞，使用流式细胞仪检测两种载体对细胞的转染效率：构建pAFP．TK．IRES2一EGFP质粒：

8、使用脂质体携带pAFP—TK—IRES2一EGFP真核细胞表达质粒转染上述三种细胞；通过Western—blot方法检测HSVtK自杀基因在肝癌细胞和肝细胞中的表达水平；使用G418筛选获得稳定转染HSVtK自杀基因的HepG2肝癌细胞株，添加不同剂量的更昔洛韦(GCV)，用CCK一8试剂检测HSVtK基因对HepG2肝癌细胞的杀伤效果。结果与