aldh2基因多态性与脑卒中易感性的关系

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万方数据泰山医学院硕士学位论文ALDI-12基因多态性与脑卒中易感性的关系研究生：周青专业：药理学导师：刘卫教授中文摘要目的测定ALDH2基因多态性，研究ALDH2各基因型在健康体检者和脑卒中患者中的分布差异，以及在脑卒中各临床分型中的分布情况，明确ALDH2对脑卒中发病的意义，为脑卒中的预防提供依据。方法收集所有研究对象血样，包括健康体检者148例(男68例，女80例)，入院确诊的脑卒中患者154例(脑梗死116例，脑出血38例)。采用实验室方法和DNA微阵列芯片法进行ALDH2基因Glu504Lys多态性检测，以上两种方法均经96通道毛细管电泳的高通量基因测序方法进行验证。对所有研究对象记录性别、年龄、籍贯、吸烟及饮酒史，有无高血压、糖尿病、冠心病等既往病史以及颈动脉易损斑块的有无、类型等基本临床资料。用#检验比较各实验组基因分布与对照组基因分布差异的显著性意义，用logistic回归分析确定ALDH2基因在脑卒中发病中的意义。结果1．成功建立了实验室检测ALDH2基因Glu504Lys多态性的方法，为大样本检测ALDH2基因多态性提供了可能，且方法经基因测序验证，结果准确、可靠。2．统计分析显示，ALDH2基因Glu504Lys多态性分布符合Hardy．Weinberg遗传平衡。3．经Z检验，ALDH2基因型及等位基因G、A在脑卒中组和正常组中分布具有显著性的统计学差异(P<0．05)，ALDH2基因多态性是脑卒中发生的危险因素。4．经￡检验，ALDH2基因型及等位基因G、A在脑梗死组与脑出血组之间分布具有显著性差异，脑梗死组基因型及等位基因A分布比例大于正常组(P0．05，基因符合遗传平衡定律，选取样本具有群体代表性。4．2ALDH2基因型分布差异ALDH2按照等位基因G和A可分为两组，将脑卒中组与正常组进行#检验，结果如表4。表4ALDH2基因型分布差异2l 万方数据泰山医学院硕士学位论文注：P<0．05，差异有统计学意义经#检验，ALDH2基因型在脑卒中组和正常组中分布具有显著性的统计学差异，且等位基因G和A在两组中分布也具有显著性差异。提示ALDH2基因多态性可能是脑卒中发生的危险因素。4．3ALDI-12基因型在脑卒中组分布差异脑卒中组可以按照临床类型分为脑梗死组和脑出血组，两组的ALDH2基因型及等位基因做#检验，结果如表5。表5脑梗死与脑出血ALDH2基因型比较注：P<0．05，差异有统计学意义结果显示脑梗死组与脑出血组之间ALDH2基因型以及等位基因A具有显著性差异。将脑卒中两组的ALDH2基因型及等位基因分别与正常对照组做#检验，结果如表6。表6脑卒中各组与正常组ALDH2基因型分布差异注：f、P表示脑梗死组与正常组比较；#。、P嚷示脑出血组与正常组比较。脑梗死组与正常对照组有显著性差异，而脑出血组与正常对照组无统计学差异，说明脑梗死可能与ALDH2基因型突变以及等位基因A有关。22 万方数据泰山医学院硕士学位论文4．4脑栓塞和脑血栓形成与ALDH2基因多态性的关系脑梗死患者可大致分为三类，包括以动脉粥样硬化斑块形成为主的脑血栓的形成、脑栓塞和腔隙性脑梗死等。在117例脑梗死病例中，剔除9例单纯腔隙性脑梗死病例后，将其余脑梗死病例(主要包括脑血栓的形成和脑栓塞)与正常对照组的ALDH2基因型做统计学分析，如表7。表7脑血栓的形成和脑栓塞与正常对照组ALDH2基因分布差异注：P<0．05，差异有统计学意义结果显示以脑血栓形成、脑栓塞发病的脑梗死组与正常组相比，ALDH2基因多态性具有显著的统计学意义，ALDH2基因突变和等位基因A可能与以脑血栓形成、脑栓塞发病的脑梗死有关。4．5各因素对脑血栓与脑栓塞形成发生的影响收集所有研究对象自勺年龄、性别、既往史(高血压、糖尿病、心脏疾病)、生活惯(吸烟、饮酒)、ALDH2基因型等指标，首先进行单因素Logistic回归分析，筛选出可能影响脑卒中发生的危险因素，如表8。对可能造成脑卒中的各因素进行多因素Logistic回归分析，筛选出影响脑卒中的独立危险因素，如表9。 万方数据泰山医学院硕士学位论文性别O．712O．2359．2989．1520．0022．0381．285～3．232基因型0．8410．4004．71l4．4060．0362．3l81．057～5．080吸烟0．4350．2642．7462．7160．0991．5450．921～2．592高血压0．9060．26911．87411．3650．0012．4741．461~4．190糖尿病1．7200．50515．30311．6140．0015．5862．077～15．023冠心病1．6410．25046．69943．0080．0005．1623．161～8．43l饮酒1．7550．40923．63418．4230．0005．7832．595～12．886年龄一0．0350．0129．4819．0240．0030．9660．945--0．988通过单因素Logistic回归模型，在a=0．05水平，筛选出影响脑卒中发生的可能因素有性别、ALDH2基因型、高血压、糖尿病、冠心病、饮酒、年龄等7项。表9影响脑血栓与脑栓塞各因素多因素Logistic回归分析结果通过多因素Logistic回归模型，在a=0．05水平，筛选出影响脑卒中发生的因素有高血压、糖尿病、冠心病、吸烟、饮酒、年龄等6项，而性别和ALDH2基因多态性并不是脑血栓形成和脑栓塞的独立危险因素。4．6颈动脉粥样硬化斑块与ALDH2基因多态性的关系由于本实验属于回顾性研究，部分临床资料缺失，在所有选取的研究对象中，除基本临床资料外做颈动脉超声检查的有66例脑梗患者。将动脉粥样硬化斑块与ALDH2经f检验结果如表10。24 万方数据泰山医学院硕士学位论文注：P>0．05，差异无统计学意义。经#检验结果显示，ALDH2基因突变与等位基因A并不是影响颈动脉斑块形成的危险因素。4．7动脉粥样硬化斑块对脑梗死发生的影响这66例脑梗患者有75．76％(50例)出现动脉粥样硬化斑块，有46．97％(30例)出现易损斑块，占出现动脉粥样硬化斑块的60％。对颈动脉行超声检查，根据易损斑块的诊断标准，判断易损斑块，超声检查如图13—15。4．8冠心病与ALDH2基因多态性的关系收集154例脑卒中患者的临床信息资料，以冠心病和ALDH2基因多态性做#检验，观察ALDH2基因多态性与冠心病的发生是否存在相关性，结果如表1l。表1l冠心病与ALDH2基因多态性的比较注：P<0．05，差异有统计学意义经#检验，冠心病的发生与ALDH2基因多态性有一定相关性，结合原始资料，ALDH2基因突变与等位基因A可增加冠心病的发生率。25 万方数据泰山医学院硕士学位论文讨化2012年的第三次全国死因调查结果显示，脑卒中的致死率高达22．45％，位居第一，世界卫生组织研究表明，我国脑卒中发生率正在以每年8．7％的速度增长，因此防治脑卒中，迫在眉睫。已有研究发现影响脑卒中发生的部分因素，药物基因组学的发展为脑卒中的防治提供了新的方向，实验探索出简单，快捷、可大样本操作的实验室方法检测ALDH2基因多态性，观察ALDH2基因多态性与脑卒中易感性的关系。国内外关于脑卒中的报道很多，大多集中在其影响因素及其临床护理、预后等方面，对基因型与脑卒中的关系也有报道，如IC53基因，MTHFR基因、瘦素受体基因、肾素一血管紧张素系统(RAS)相关基因等对脑卒中均有影响，通过PCR-RFLP法对IC53基因10586位点进行基因多态性检测，突变纯合TT基因型可增加血栓性脑梗死发生的危险【3刚。同样用PCR方法与限制性内切酶法结合对MTHFR基因C677T位基因进行多态性分析，杂合型CT和突变纯合型TT型可增加脑卒中的发病危险【37】。利用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性检测瘦素基因Gln223Arg位点多态性，结果显示等位基因A可增加脑卒中的发病危斛381。有研究发现影响脑卒中发生与肾素一血管紧张素系统(RAS)相关的基因主要包括肾素基因(REN)、血管紧张素原(AGT)基因，一氧化氮合成酶对缺血性脑卒中的影响结论不一1391。但关于ALDH2基因与脑卒中的报道很少，国外有文献报道ALDH2基因型是日本男性多腔隙性梗死的危险因裂401，也有报道显示携带ALDH2*2基因是台湾地区有饮酒史的中风患者的独立保护因素1411。国内有文献报邋421，采用DNA微阵列方法检测ALDH2基因多态性，显示病例组ALDH2基因GG型与等位基因G均明显高于对照组，提示GG型与等位基因G可能是脑梗死发生的危险因素，并且可能是通过影响高血压和NO水平，而不是通过影响酒精代谢途径。但也有研究发现【431，增强ALDH2的活力，可减轻缺血性脑损伤，可能与ALDH2清除脑内有毒醛类4一HNE的含量而发挥神经保护作用有关。目前国外最新报道提出ALDH2可能是脑卒中发生的保护因素，ALDH2基因突变可能成为脑卒中发生的危险因素m】。本实验通过检测ALDH2基因多态性，结合临床，发现ALDH2在临床各类脑梗死患者的分布存在差异，并且针对这种差异做出合理解释。临床上主要采用DNA微阵列芯片法检测ALDH2基因多态性，但由于该方法价格较昂贵，不适宜进行大样本检测，对此我们开发出实验室方法，采用PCR-电泳方法对ALDH2基因多态性进行检测，检测结果经基因测序方法验证，结果可靠且成本26 万方数据泰山医学院硕士学位论文低廉，适合实验室进行大样本检测。实验收集所有研究对象的临床资料(包括既往史、生活习惯等)和ALDH2基因类型，并做统计学处理，结果显示脑卒中组的GA／AA型和等位基因A明显高于正常健康人群，ALDH2基因突变可能是对脑卒中的发生产生一定影响，经多元Logistic回归分析，影响脑卒中的因素有高血压、糖尿病、冠心病、吸烟、饮酒、年龄等因素，但是ALDH2基因多态性是否是脑卒中发生的独立危险因素还有待进一步研究。针对影响脑卒中发生的动脉粥样硬化斑块，我们发现脑卒中更易产生易损斑块，但斑块的产生与ALDH2基因多态性是否直接相关有待研究，最后以冠心病的有无与ALDH2基因多态性做统计学分析，发现ALDH2基因多态性与冠心病的发生亦有关。1实验室方法与其他ALDI-12基因多态性检测方法的比较实验中探索出了检测ALDH2基因多态性的实验室方法，首先提取血样DNA，并检测DNA浓度，加入PCR扩增体系，采用PCR—CTPP方法，设计两对引物，引物为PAGE级别，通过分子大小和构象的不同将正确的全长序列和错误序列进行分离，纯度大于≥95％，可用于RT-PCR引物、PCR克隆测序、定点突变等。每对引物中均有一条引物包括突变点在内，即Rl和F2包含突变点，并设计出对应配对引物，使目的片段大小不同，能通过琼脂糖凝胶电泳区分，从而区分样本ALDH2基因型。电泳出现检测PCR反应是否成功的内参条带，即只加入引物Fl和R2进行PCR出现的455bP大小的片段。该实验室方法与传统的聚合酶链式反应．限制性片段长度多态性检测方法相比，只需一次PCR，一次电泳，无需过夜酶切，过程简单、快速；与基因芯片技术相比，节约成本、时间，适合大样本的ALDH2基因多态性的检测。由于实验过程需要四条引物同时加入PCR反应体系，错配率较高，为增加扩增特异性体系中加入体系体积10％的甘油，但仍有干扰条带的存在，怀疑是引物错配生成二聚体，通过调整引物浓度、加入样本DNA浓度、改变退火温度以及改变循环数等措施，仍无法消除二聚体，但由于二聚体片段大小在100bP以下，并不影响目的片段203bP、296bP的判断和基因型的分析，因此可忽略此处二聚体的影响。、DNA测序技术是通过对所选择的与疾病、代谢、用药等相关的基因位点，经过大样本表型与基因相关性分析验证、功能分析验证和动物模型试验认证后确定的。由世界卫生组织(WHO)在2004年首次推出的基因检测国际标准，是对所检测基因区段的每个核苷酸进行检测。准确率高达99．99％，被誉为国际基因检测金标准。DNA测序原理包括化学修饰法测序和经典的Sanger测序，常用的测序技术包括27 万方数据泰山医学院硕士学位论文高通量测序技术、454焦磷酸测序、聚合酶克隆法、离子半导体测序等方法。实验室方法对ALDH2基因多态性的检测结果已经基因测序验证，测序采用类似经典的Sanger测序原理的高通量测序技术。两种方法结果吻合，准确、可靠，可用于大样本的检测。2Hardy．Weinberg遗传平衡检验Hardy—Weinberg定律又称为群体平衡法则，主要是指群体的基因频率和基因型频率在一代又一代的繁殖传代中保持不变，达到遗传平衡应该具备以下条件【45】：①大群体②随机婚配③没有自然选择④无基因突变⑤无迁移。有研究对42篇Meta分析的591篇文献进行再次Meta分析，对其中3篇文献偏离Hardy—Weinberg进行校正后发现，统计学关联性消失【461。因此，在基因与疾病的关联性分析中，偏离Hardy-w色inberg平衡会影响关联性研究的结果，进行Hardy．Weinberg平衡检验是进行统计学分析的基础。我们在实验中很难做到对一个大群体的每个个体进行分析，因此会选择一定数量的个体作为样本，由样本结果进行对群体的估计，因此必须进行Hardy．Weinberg平衡检验，选择有代表性的样本。如果检测样本的实际数与理论数存在显著性差异，则说明样本量选择较小，并未达到遗传平衡状态，不能用此样本结果对群体进行估计，不具有代表性。实验中通过进行Hardy—Weinberg平衡检验可以看出，P>0．05，样本与群体的ALDH2基因型分布无统计学差异，样本具有一定代表性，符合遗传平衡定律，可进行下一步的统计学分析。3脑卒中组与正常对照组ALDI-12基因多态性的比较将脑卒中组与正常对照组的ALDH2基因型和等位基因均经￡检验，结果P值均<0．05，结合原始数据资料可知，脑卒中组ALDH2杂合型和突变型以及等位基因A明显高于正常对照组，提示脑卒中的发生可能与ALDH2突变以及等位基因A有关。进一步将脑卒中组分为缺血性脑卒中组和出血性脑卒中组，经Z检验，缺血性脑卒中组(主要指脑梗死)与正常对照组ALDH2基因型有显著性差异，而出血性脑卒中组与正常对照组相比，无统计学差异，结果显示脑梗死的发生可能与ALDH2发生碱基的置换而导致的突变有关，而脑出血与ALDH2基因多态性无相关性。有研究表明腔隙性脑梗死的发生与ALDH2*1／1(即GG型)有关，可能GG型通过影响高血压、No途径增加腔隙性脑梗死的发病危险。国外也有文献指出ALDH228 万方数据泰山医学院硕士学位论文基因型GG型可能是导致多发性脑梗死的危险因素Ⅲ，411。脑梗死组去除9例腔隙性脑梗死患者，将脑血栓形成与脑栓塞患者合并与正常对照组进行统计学分析，结果显示脑血栓形成与脑栓塞组ALDH2基因突变明显高于正常对照组。4脑梗死与ALDH2基因多态性的关系脑梗死的通常表现是猝然昏扑，口眼歪斜，运动障碍等一系列症状，且多为中老年人，在临床上主要分为以动脉粥样硬化斑块为主的脑血栓形成、脑栓塞、腔隙性脑梗死三大类。脑血栓形成是由于动脉粥样硬化使血管内腔狭窄而导致血管闭塞，血栓的形成，导致局部脑供血不足，软化坏死。脑内血栓因形成部位的区别而导致症状有很大差异，中老年易形成血栓，且多在安静状态下发病，初期肢体麻木、无力、头晕，数日会出现半侧肢体失灵，失语等严重情况，严重者造成死亡。脑栓塞与脑血栓形成有很大差异，原发病变不在脑内，而是在身体其他部位形成“栓子”进入血管后，流入脑动脉血管，堵塞管腔而使脑组织局部发生缺血、软化，引发脑栓塞。起病急，多无先兆，临床上表现为头痛、呕吐、意识不清等症状。实验统计学分析结果显示，脑血栓形成与脑栓塞的发生可能与ALDH2发生突变有关。这可能是由于ALDH2*1／2和ALDH2*2／2基因型携带者乙醛脱氢酶活性较差，使带有醇羟基的药物(如硝酸甘油)或物质(如酒精)在体内由乙醇脱氢酶代谢产生的醛类产物无法代谢，从而导致醛类等有害物质在体内蓄积，如在氧化应激中的过氧化损伤中产生的4一羟基一2一壬烯醛(4一}n叮E)，在体内蓄积容易造成缺血以及心脏等器官的损伤。4-HNE是606不饱和脂肪酸经脂质过氧化反应形成的醛类代表产物之一，在体内可代谢4-HNE的酶系统有谷胱甘肽一S一转移酶，醛脱氢酶等，谷胱甘肽一S一转移酶主要是通过与4-HNE形成复合物排出体外，醛脱氢酶主要是催化4-HNE末端醛基代谢成无活性物质【471。并且有研究表明不同细胞系谷胱甘肽．S一转移酶与4-HNE结合成复合物的能力不同，且代谢途径有明显差异‘4¨¨。4-HNE作为氧化应激过程的标志性产物，有研究对4-HNE的生理浓度进行了测定【52。53】，在0．3～0．7pmol／L，将4-HNE衍生化后采用高效液相色谱法(HPLC)和气质联用(GC／MS)方法检测4一HNE的体内含量【531，用以反映阿尔茨海默病的氧化应激程度，但其方法较为繁琐，现常用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测；另外长期摄入酒精会导致肝细胞的氧化应激和脂质过氧化反应，该过程29 万方数据泰山医学院硕士学位论文的重要产物之一4-HNE作为肝细胞的致敏因子，通过抑制肝细胞内肿瘤坏死因子a(TNF—Q)介导的NF．KB抗肿瘤调亡信号通路，诱导酒精性肝损伤154。。4-HNE可以与蛋白质的相关位点结合，对蛋白质进行修饰，引起分子内和分子间发生交联，使蛋白质功能发生障碍；还可以与酶结合，使酶失去活性【4¨；与核酸分子结合成复合物，不同浓度引起不同的基因毒性，可发生姐妹染色体互换、小核，高浓度的4-HNE还可以引起染色体畸形f551。4-HNE参与炎症反应，通过加成反应修饰肺细胞外基质蛋白，刺激巨噬细胞产生ROS、以及蛋白酶，导致组织破坏和炎症发生[561。另外4-HNE可以诱导细胞凋亡，通过影响线粒体电子传递链的功能，促进凋亡小体的形成和casPase的激活来诱导细胞凋亡【5¨。因此，4-HNE作为一种有害毒物在体内蓄积，成为多种疾病发生的诱因，而ALDH2作为一种重要的醛脱氢酶，可参与4一HNE体内的代谢，影响其在体内的浓度。有研究证实在SPrague．Dawley(SD)大鼠侧脑室注入4一HNE后，大脑中动脉栓塞(middlecerebralarterialocclusion，MCAO)程度增加，急性脑缺血损伤加重，脑梗死面积增加45．9％，缺氧缺糖诱导的神经元内4．HNE的增加可被ALDH2激动剂消除，因此ALDH2基因突变增加脑梗死发生的风险，可能由于ALDH2突变者对体内4-HNE的清除能力显著下降有关，从而导致4一HNE蓄积，诱导细胞凋亡，增加对组织和靶器官的损伤【45|。有实验建立了离体缺血／再灌注损伤模型，激活ALDH2活性后，可以使大鼠心肌梗死面积减少60％15引。ALDH2可以加速4-HNE等有毒醛类物质的清除，减轻这类物质对心肌的氧化损伤，从而产生心肌保护作用1591。因此，脑血栓形成与脑栓塞与ALDH2基因突变有关可能是由于ALDH2基因突变导致体内醛类物质特别是4一HNE的堆积所致，而非通过影响酒精代谢途径。腔隙性脑梗死是脑梗死的另一种类型，它是在高血压、动脉硬化基础上，脑深部微小动脉发生闭塞引起脑组织缺血、软化病变。临床上患者仅有轻微注意力不集中、轻度头痛头昏、眩晕、反应迟钝等轻微症状。但是如果腔隙性脑梗死发生在重要关键部位或是面积较大时可出现严重的神经功能障碍，反复发作可能导致发生局限性中风和血管痴呆等。其病因可能有三种：①与高血压导致小动脉及微小动脉壁脂质透明变性导致管腔闭塞有关；②与大脑中动脉和基底动脉粥样硬化及形成小血栓阻塞深穿支动脉有关；③各类小栓子及动脉粥样硬化斑块阻塞血管等有关。ALDH2基因杂合型和突变纯合型使体内羟基类物质的代谢受阻，醛类有害物质堆积，对组织和器官造成不可逆的损伤。最近的研究160】发现，ALDH2与血管内皮产30 万方数据泰山医学院硕士学位论文生的一氧化氮有关，一定范围内的一氧化氮可发挥其血管舒张作用进而改善缺血区的血供，ALDH2*1／半2和ALDH2*2／*2基因型携带者不能产生足量一氧化氮，以致缺血区症状加重。NO作为递质、第二信使参与体内众多生理病理过程。生理范围内的NO可以舒张血管，抑制平滑肌细胞的增殖以及血小板的粘附聚集，是心血管疾病治疗过程的一个有益因子，但是过高浓度的NO则成为炎症损伤过程中的损伤因子，加速炎症发生，NO通过增加血管的损伤而增加某些血管性疾病的发生，因此ALDH2基因型GG型可能通过影响高血压、NO途径而增加腔隙性脑梗死的发生。不管患者是脑梗死的哪种临床类型，ALDH2基因型分布均不同于正常人群，ALDH2基因型GG型在腔隙性脑梗死中的分布明显高于正常人群，可能与NO途径有关，而在脑血栓形成和脑栓塞的脑梗死中，ALDH2基因型突变型明显高于正常人群，可能是由于ALDH2与体内醛类物质的代谢有关，若ALDH2基因突变，可导致醛类物质在体内的堆积，特别是4一HNE等有害物质堆积可诱导细胞凋亡，导致对靶器官的损害，加重脑缺血损伤。因此，ALDH2对脑梗死各临床类型的影响并不是通过酒精代谢途径。5动脉粥样硬化斑块与ALDH2基因多态性的关系对回顾性研究中做动脉粥样硬化斑块B超检查的66例脑梗死患者，分析结果显示，ALDH2基因突变与等位基因A并不是颈动脉斑块的形成的危险因素，颈动脉粥样硬化斑块的形成与ALDH2基因多态性可能无关。有研究表明，脑梗死组颈动脉斑块形成的比例和ALDH2幸1／2和ALDH2*2／2基因型频率均高于健康正常人群，并且ALDH2*1／2和ALDH2*2／2比ALDH2*1／1更容易形成易损斑块。颈动脉斑块的稳定性与人类ALDH2基因G504A位点的多态性有关【611，本实验通过将颈动脉斑块与ALDH2基因型进行Z检验，结果显示ALDH2基因多态性可能与颈动脉斑块的形成无关，这可能是由于实验属于回顾性研究，部分临床资料的缺失，医生对因脑卒中入院的部分患者进行颈动脉超声检查，可能与患者临床症状的严重程度有关，综合各种检查结果做出患者是否需进行颈动脉检查的判断，如果该脑卒中患者有高血压、高血脂等既往病史，吸烟等不良生活习惯，医生可能更倾向于建议患者做颈动脉超声检查，因此在患者的选择上存在一定偏倚，另外病例数较少，都对此次回顾性研究结果存在一定影响。另外，研究中选取的研究对象是定位于颈动脉系统的动脉粥样硬化性脑梗死患者，可能对实验结果造成一定影响。3l 万方数据泰山医学院硕士学位论文因此，对于动脉粥样硬化斑块的形成是否与ALDH2基因多态性有关，还有待进一步研究。6脑梗死与动脉粥样硬化斑块的关系为不干预临床治疗，我们进行了回顾性实验研究，对66例脑梗死患者的动脉粥样硬化斑块进行了超声检查，结果显示，脑梗死的发生与动脉粥样硬化斑块的形成有关，且以形成易损斑块为主。有报道称【621，颈动脉内存在粥样硬化斑块发生脑梗死的危险是不存在粥样硬化斑块发生脑梗的3倍。大量临床资料证明，脑梗死的发生与动脉粥样硬化斑块的形成有关，也有研究指出斑块可以增加颈动脉系统的脑梗死风险，但对椎基底系统的脑梗死影响不明显1631。这可能是由于粥样硬化斑块的占位效应导致的颈动脉狭窄，以及随着斑块的发展，不稳定斑块形成并破裂产生栓子而引起颈动脉颅内段的分支梗死MI。颈总动脉分又处是颈动脉粥样硬化斑块的多发部位，这可能是由于颈动脉分叉处及成角处或内膜表面不光滑会干扰层流，导致血流急致涡旋流产生，从而使内膜受损，乳糜微粒和脂蛋白易聚集于此发生栓塞，动脉粥样硬化斑块的形成成为血栓形成的重要促进因素，颈动脉分叉处湍流速度和压力较大，使栓子易脱落，进入颅内血管后形成脑梗死。脑梗死的产生不仅与血管的狭窄有关，而且与斑块的性质密切相关，若形成的斑块质地松散，内膜粗糙，不规则，不均质，具有较薄的纤维帽和较大的脂质核心，具有易损斑块的特征，则其较容易引发斑块的破裂和出血，引起栓塞。另外，适量饮酒对脑卒中是有益的，如红葡萄酒可以使体内高密度脂蛋白增加，有助于将胆固醇运送至肝脏代谢，减少血胆固醇含量，防治动脉粥样硬化，预防脑梗死的发生。但酗酒容易伎酒精作用于脑血管平滑肌而引起血管痉挛，血液中的酒精含量增高，直接、迅速改变血液粘稠度，降低脑血流，促进卒中的发生【l训。特别是ALDH2*1产2和ALDH2*2／*2基因型携带者应避免饮酒，而ALDH2*1／*1携带者虽然能较快代谢进入体内的酒精，使其由乙醛转化为乙酸，并最终代谢为对人体无害的水和二氧化碳，但是也应该饮酒适量，避免因酒精过度摄入造成器官损伤。7冠心病与ALDH2基因多态性的关系大量研究结果表明，动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)的形成及其并发症的发生发展与氧化应激(OxidativeStress)和活性氧(ReactiveOxygenSPecies，ROS)有密切的关系【65】。一些过氧化物和羟基自由基的等物质的存在使细胞内的活性氧大量蓄积，引起氧化损伤过程，而线粒体是活性氧产生的主要场所，活性氧不仅可以诱导32 万方数据泰山医学院硕士学位论文炎症的产生，还可以促进脂质的过氧化反应，导致多种活性醛如乙醛、丙二醛(MDA)、4．羟基壬烯醛(4一HNE)等的产生。活性醛可通过诱导活性氧的产生而引起血管内皮功能障碍，从而与动脉粥样硬化有关【661。有研究表明ALDH2G504A基因多态性与中国长沙地区的汉族人群冠心病的发生有关，ALDH2可能通过影响血清HDL—C的水平和内皮中二甲基精氨酸二甲胺水解酶1(DDAHl)的表达和非对称二甲基精氨酸(ADMA)的水平有关，并且携带A等位基因的个体患冠心病的风险是ALDH2基因型GG个体的1．85倍167|。ALDH2基因多态性与冠心病的关联性主要表现在心绞痛与心肌梗死方面，ALDH2基因突变者少量饮酒可能就会引发心绞痛【6引，并且由于乙醛的堆积引起肾上腺分泌增加，心率增加【6引，在心肌梗死方面，有研究证实ALDH2基因突变通过降低HDL．C而增加日本人心肌梗死的发生【701，而ALDH2基因突变和较低水平的HDL．C成为韩国老年男人发生心肌梗死的独立危险因烈71J。实验结果显示ALDH2基因突变与冠心病的发生有一定关联，这可能是由于ALDH2基因突变者体内脂质过氧化物水平明显升高，ALDH2基因突变会增加氧化应激反应，ALDH2保护作用的降低可能会降低增加心肌梗死的风险。男性饮酒频率明显高于女性，氧化应激增加，使ALDH2清除体内脂质过氧化物水平的能力被掩盖【721，因此ALDH2并不是通过酒精代谢途径来发挥其心血管的保护作用，而是通过清除体内过氧化物(如4一HNE)水平来实现的。另一方面，临床上治疗冠心病心绞痛急性发作的常规首选方法是舌下含服硝酸甘油片，但是如果服药患者是ALDH2*l／宰2和ALDH2誊2／车2携带者的话，服用后无效。这是由于乙醛脱氢酶2影响硝酸甘油生成有效代谢物NO，若ALDH2(Glu504Lys)突变，则乙醛脱氢酶2的硝酸酯酶活性会降低10倍以上，使硝酸甘油无法生成NO，难以发挥疗效。因此，检测患者ALDH2基因型，为临床医生合理使用硝酸甘油，实现个体化用药，避免用药无效导致的意外死亡提供依据。8基因多态性检测的意义人类基因多态性对阐明人类对疾病和毒物的易感性和耐受性、疾病多样性以及用药后对治疗的反应性差异起到重要的作用。早期关于基因多态性的研究是关于人类白细胞抗原(humanleukocyteantigen，HLA)，研究发现大约90％1拘强直性脊椎炎病人存在HLA．B27抗原，使HLA分型具有了诊断价值。基因多态性的检测使临床医生可以根据患者独特的基因型制定给药方案，达到个体化用药目的。以个体化医学为代表33 万方数据泰山医学院硕士学位论文的新型治疗标准，不断被临床采用，形成新的医疗模式，极大提高了提高了治疗的安全性和有效性，降低不良事件的发生，有效降低医疗费用的支出。例如华法林的使用，美国AEI．BROOKINGS法规研究联合中心发布的研究数据显示，每年新增的200万华法林使用者中，临床医生根据CYP2C9和VKORCl基因多态性指导华法林的用量，每年可减少85400起药物过量引发的出血事件，减少17100起药量不足引起的脑卒中事件，可节约11亿3千万美元的医疗费用。在遗传学方面，虽然大多数的基因多态性并不引起遗传病，但其可以作为遗传标记使用，比如对微卫星和小卫星DNA进行多态性标记，用于遗传病的连锁诊断；利用各条染色体上位置己知的众多的多态性标记，通过患病家系的连锁分析，找到多基因病的致病基因或相关基因的位置，并为这些基因的分离克隆提供依据。利用基因多态性标记的关联分析不仅可以提示相关基因存在的位置，用于疾病的分型与治疗，也可以根据患者的基因多态性来解释某一疾病的病因和临床表现。在预防医学方面，基因多态性的研究主要涉及两方面，包括与病因未知的疾病关系的研究和对已知特定环境因素致病易感基因的筛选。基因多态性具有种族差异明显的特点，因此对基因一环境交互作用分析上，不同的种族之间结果有可能不同。所以，开展针对我国人群的基因多态性与环境作用相互关系的研究具有一定的必要性。并且基因多态性的研究在职业病医学中也具有一定的实际意义。如通过对易感基因和易感生物标志物的分析，将携带敏感基因型的人区别开来，采取针对性的预防措施，预防职业性工作带来的危害。9ALDH2激动剂的展望有研究表明‘72IALDH2基因rs671多态性通过降低HDL—C水平，从而增加不饮酒的中国长沙地区汉族人群的冠心病风险，有文献指出增加ALDH2的活力可以降低胃癌和食管癌的发病【731，提高ALDH2的活力，可以减轻酒精中毒症状和乙醇导致的肝损伤，而且ALDH2基因多态性的检测对胰腺癌的诊断可能有一定的帮助【7训，这在临床上对疾病的预防、诊断有一定的意义。因此ALDH2激动剂的开发，有很好的应用前景，目前ALDH2激动剂主要分为三大类，Alda-1、黄酮类化合物、开口箭与筒鞘蛇菰提取物。Alda-1是ALDH2的特异性激动剂，Alda-1可以激活ALDH2*1和ALDH2*2，使ALDH2*1的活性提高1．5倍，ALDH2*2的活性提高6倍，当有NAD(P)+存在时，Alda-1可以使ALDH2*2的活性增加100倍，并且能相应提高ALDH2*2对脂类的催化活性。大量的实验结 万方数据泰山医学院硕士学位论文果表明，黄酮类化合物具有消除自由基、抗氧化、调节免疫等功能，ALDH2在进行醛类的催化氧化时，产生大量的自由基，黄酮类化合物通过清除过量自由基使ALDH2活性增加而增强对醛类物质的代谢。开口箭与筒鞘蛇菰提取物通过提高ADH、ALDH、SOD等物质的活性，加快酒精代谢，减轻自由基的蓄积，降低脂质过氧化反应，从而起到保肝作用。有研究对糖尿病缺血再灌注大鼠长期给予ALDH2激动剂一低浓度乙醇干预，使心肌血流动力学得到恢复，并且促进再灌注期间LVDP、±dP／dtmax、RPP抬高，LVEDP降低，LDH释放减少，结果提示小剂量乙醇长期干预对糖尿病大鼠可以发挥心肌保护作用，并且心肌ALDH2mRNA和蛋白表达明显增高，提示激动ALDH2可以发挥心肌保护作用。国外有文献对ALDH2与糖尿病的关系进行了研究，Dakeishi等【751观察到ALDH2*1／1型的女性的空腹血糖水平明显低于其他基因型。有研究‘76】已经证实适量饮酒可以通过影响HDL．C、糖化血红蛋白HbAIc和纤维蛋白原对心血管起保护作用。因此，ALDH2激动剂对糖尿病患者的血糖水平、糖化血红蛋白HbAlc等指标有一定的影响。ALDH2激动剂的开发为脑卒中的防治提供了新的思路，酗酒成为脑卒中发生的危险因素，但是低浓度的酒精可以激动体内ALDH2活性，所以少量适度饮酒，可能成为防治脑卒中的最简单有效的方法。ALDH2基因多态性与冠心病、食管癌、胰腺癌等一系列疾病均有一定程度上的关联，ALDH2*2等位基因的携带通过影响各自不同的途径而使这些关联疾病的发生率升高，因此ALDH2激动剂的开发与利用对临床疾病的防治有一定的意义。总之，药物基因组学的发展让我们从基因的角度认识了自身的独有特点，“个体化用药”的观念己为临床所接受，针对患者基因型，提出个体化用药方案，是未来临床治疗疾病的新方向，相信基因检测在临床治疗中有更广泛的应用前景。35 万方数据泰山医学院硕士学位论文结论1．泰安地区人口中存在ALDH2基因Glu504Lys多态性。2．脑血栓形成与脑栓塞组ALDH2基因多态性以及等位基因A的分布明显高于正常人群。3．ALDH2基因突变在脑血栓形成、脑栓塞类型的脑梗死中分布明显高于正常人群，但ALDH2基因突变是否是这类脑梗死发生的独立危险因素有待进一步研究。36 万方数据泰山医学院硕士学位论文附图2-●■●一2●2图l芯片点阵列分布①质控探针②5046探针③504A探针(1)504G探针阳性信号，样本判定为野生纯合型(AI，DH2·1／1，即GG型)(2)504A探针阳性信号，样本判定为突变纯合型(ALDH2幸2／2，即AA型)(3)504G、504A探针阳性信号，样本判定为杂合型(ALDH2·l／2即GA型)图2Glu504Glu(ALDH2504位谷氨酸纯合子)图3Glu504Lys(ALDH2504位谷氨酸／赖氨酸杂合子)图4Lys504Lys(ALDH2504位赖氨酸纯合子)FlRl——————斗●————一F2———————————————◆GAR2·●——————————一图5PCR反应示意图37 万方数据泰山医学院硕士学位论文50。=8P4Dd／3-P300Bp2口oe户工234图6l通道是DNAMarker，2通道是空白对照组，3通道是ALDH2*1／1基因型，4、5通道到是ALDH2*1／2，6通道是ALDH2*2／2图7l通道是DNAMarker，2通道是空白对照组，3、4、5通道是样本图8l通道是DNAMarker，3、4、5通道是回收后的DNA样本图9ALDH2·l／l基因型38 万方数据泰山医学院硬士学位论文／|心㈨肌删ALDH2幸l／2基因型．一14哩一一．一．j!o．一一一．．一．÷6巴．．一．．．，!巴C1。．G’：G’：GCC。GC．GCG’CCCC，C图llALDH2}2／2基因型础I‰图12ALDH2幸2／2基因型Blast结果卜{镌1【二篱■》图13正常颈动脉管腔图14易损斑块形成图15硬化斑块形成39 万方数据泰山医学院硕士学位论文参考文献[I】中国工程院．积极稳妥开展颅内外脑血管重建手术[J】．中国现代神经疾病杂志，2012，(02)：92．【2】JovicevicM，Divjaki，SlankamenacP,eta1．Non．athemscleroticarterioPathyasthecauseofischemicstrokeamongyoungadults[J]．MedPregl,2010，63：324—332．．[3】TruongMinhPham，YoshihisaFujino，NoritakaTokui，eta1．MortalityandriskfactorsforstrokeanditssubtyPesinacohortstudyinJaPan[J】．PreventiveMedicine，2007，44：526—530．[4】RosengrenA，HawkenS，OunPuuS,eta1．AssociationofPsychosocialriskfactorswithriskofacutemyocardialinfarctionhal19casesand13648controlsfrom52countries(theINTERHEARTstudy)：case—controlstudy[J]．Lancet，2004，364：953—962．[5】WALTERF．ChallengeofPersonalizedhealthcare：Towhatextentismedicinealreadyindividualizedandwhatarethefuturetrends[J]．MedSciMonit,2004，lO(5)：111．123．[6】Nicholson，J．K．Globalsystemsbiology,PersonalizedmedicineandmolecularePidemiology[J]．MolSystBiol，2006，2：52．[7]RiouxPEClinicaltrialsinPharmacogenotiesandPharmacogenomies：methodandaPPlications[J]．AmJHealthSystPharm，2000，57(9)：887—898．[8】RomkesM，BuchSC．GenotyPingtechnologies：aPPlicationtobiotransformationenzymegeneticPolymorPhismscreening[J]．MethodsMolBiol，2005，291：399—414．【9]曹红，孙长凯，王喜宽．缺血性脑卒中相关基因研究进展阴．中华老年心脑血管病杂志，2004，(05)：353—355。[10]SHAPERAC‘POCOCKSJ，eta1．Britishregionalheart，study：cardiovascularriskfactorsinmiddle—agedmenin24towns[J】．BMJ,1981，283：179—186．[1l】ElkindMS，SaccoRL．StrokeriskfactorsandstrokePrevention[J]．SeminNeurol，1998，18(4)：429—440．[12】PetersenDR，DoomJA．Reactionsof4-hydroxynonenalwithProteinsandcellulartargets[J]．FreeRadicBiolMeZ2004，37：937—945．[13】刘岩．对350例脑卒中病人相关危险因素的调查分析[J】．护士进修杂志，2002，(01)：71—73．【14】李志祥，谢桂岚．ALDH2基因第12外显子(G／A)多态性在北京汉族人群的检测【J】．中国现代医学杂志，2005，03：457—458。40 万方数据泰山医学院硕士学位论文[15]赵宁民，王睿，梁蓓蓓，等．药源性双硫仑样反应[J】．中国临床药理学杂志，2011，01：59—60．[16】张红，苏德森．戒酒药双硫仑【J]．中国新药杂志，2000，11：747—749．[17】SunL，FerreiraJ．C，Mochly—RosenD．ALDH2activatorinhibitsincreasedmyocardialinfarctioninjurybynitroglycerintolerance[J]．ScienceTranslMed,2011，3(107)：107一111．[18】高秀丽，景奉香，杨剑波，等．单核苷酸多态性检测分析技术明．遗传，2005，27(1)：110—122．[19】NewtonCR,GrahamA，HePtinstallLE，eta1．AnalysisofanyPointmutationinDNA．TheamPlificationrefractorymutationsystem(ARMS)[J]．NucleicAcidsResearch，1989，17(7)：2503—2516．[20】SommerSS，CassadyJD，Sobell儿，ela1．AnovelmethodfordetectingPointmutationsorPolymorPhismsanditsaPPlicationtoPoPulationscreeningforcardersofPhenylketonuria[J】．MayoClinicProceedings，1989，64(11)：1361—1372．【21】OkayamaH，CurielDT,BrantlyML，eta1．RaPid，nonradioactivedetectionofmutationsinthehumangenomebyallele—sPecificamPlification[J]JournalofLabClinicMedicine，1989，l14(2)：105—113．[22】WuDY,UgozzoliL，PalBK，eta1．Allele—sPecificenzymaticamPlificationofbeta—globingenomicDNAfordiagnosisofsicklecellanemia[J]．ProcNatlSciUSA，1989，86(8)：2757—2760．[23】LiuQ，ErikC，Thorland，JohnA．eta1．OverlaPPingPCRforBidirectionalPCRAmPlificationofSPecificAlleles：ARaPidOne—TubeMethodforSimultaneouslyDifferentiatingHomozygotesandHeterozygotes【J】．GenomeResearch，1997，7(4)：389—398．[24】李湘青，韩红星，续运勤．颈动脉粥样硬化斑块与脑梗死[J】．医学综述，2008，02：232．234．[25】KelemenLE，AnandSS，HegeleRA，eta1．AssociationsofPlasmahomocysteineandthemethylenetetrahydrofolatereductaseC677TPolymorPhismwithcarotidintimamediathicknessamonySouthAsian，ChineseandEuroPeanCanadians[J]．Atherosclerosis，2004，176(2)：361—370．[26】AronowWS，AimC，GutsteinH．IncreasedPlasmahomocysteineisanindePendentPredictorofnewatherothromboticbraininfarctioninolderPersons[J]．AmJCardiol，2000，86(5)：585—586．41 万方数据泰山医学院硕士学位论文[27]王雅斌，陈森福，林悦静，等．颈动脉粥样硬化超声检查在脑梗死诊治中的应用[J]．当代医学，2012，20：5—7．[28】HamajimaN．PCR-CTPP：anewgenotyPingtechniqueintheeraofgeneticePidemiology[J]．ExPertRevMolDiagn，2001，1(1)：119—23．[29]PettyGW,BrownRDJr,WhisnantJP,eta1．IschemicstrokesubtyPes：aPoPulation—base—dstudyofincidenceandriskfactors[J]．Stroke，1999，30：2513--2516．[30】王林，熊全庚，张春莉，等．颈动脉血管超声成像对脑卒中高危人群颈动脉狭窄的筛查及脑卒中危险因素的预测[J】．中国老年保健医学，2012，03：5—7．[3l】王林，熊全庚，张春莉，等．颈动脉超声在筛查颈动脉狭窄及脑卒中高危人群中的应用【J】．中华老年心脑血管病杂志，2013，02：129．131．[32】华扬，郑宇，凌晨，等．动脉粥样硬化危险因素与颈动脉狭窄和缺血性卒中的相关性[J】．中国脑血管病杂志，2004，02：69．72．[33]赵世华．易损斑块的含义和诊断标准【J】．磁共振成像，2010，06：408—410．[34]姜国忠，吕玉民，牛向丽，等．盐藻肌动蛋白基因启动子驱动的bar基因表达作为核转化筛选标记(英文)明．遗传学报，2005，04：424—433．【35】林艳，李照熙，董卫华，等．一种去除聚合酶链式反应引物二聚体的简便方法叨．新乡医学院学报，2012，06：417—418+421．[36】宋莉，秦宝明，叶珏，等．IC53基因多态性与脑卒中的关系【J】．中国分子心脏病学杂志，2002，(04)：10—13．[37]张海洋，张金华，张会敏．MTHFR基因多态性与脑卒中的相关性【J]．中国老年学杂志，2012，(04)：690—691．【38】应忠明．瘦素受体基因Gln223Arg多态性与脑卒中相关性的研究[J]．心脑血管病防治，2012，(03)：186—188．[39]薛钢，王朝霞．缺血性脑卒中与基因多态性的相关性研究进展【J】．中国实用医药，2013，04：244—245．【40】NagasawaH，WadaM，ArawakaS,eta1．APolymorPhismofthealdehydedehydrogena—se2geneisariskfactorformultiPlelacunarinfarctsinJaPanesemen：theTakahataStudy[J]．EuroPeanJournalNeurol,2007，14(4)：428—34．【41】YaoCT,ChengCA，WangHK，eta1．TheroleofALDH2andADHlBPolymorPhisminalcoholconsumPtionandstrokeinHanC11jnese[J】．HumGenomics，201l，5(6)：569—76．【42】徐筱婧．ALDH2基因单核苷酸多态性与脑梗死的关联分析[D]．遵义医学院，2012．42 万方数据泰山医学院硕士学位论文[43】郭晋敏．ALDH2对缺血性脑卒中的作用研究[D】．第二军医大学，2012．[44】SunA．ALDH2，anovelProtectoragainststroke?，Ce／／Research，2013，23(7)：874—875．[45】刘红，胡永华．遗传流行病学研究中的H—w平衡检验【J】-中南大学学报(医学版)，2010，01：90—93．[46]TrikalinosA，SalantiG，KhouryMJ，eta1．ImPactofviolationsanddeviationsinHardy·-WeinbergequilibriumonPostulatedgene··diseaseassociations[J]．AmJEPidem—iol，2006，163(4)：300—309．【47]陈娟，冉丕鑫．4一羟基壬烯醛在疾病发生机制方面的研究进展[J]．国际呼吸杂志，2006，11：821—824．[48]HartleyDP,RuthJA，PetersenDR．ThehePatocellularmetabolismof4一hydroxynonenalbyalcoholdehydrogenase，aldehydedehydrogenaseandglutathioneS—transferase[J]．ArchBiochemBioPhys，1995，316(1)：197—205．[49】LuckeySW,PetersonDR．Metabolismof4一hydroxynonealbyratkuPffercell[J]．4rchBiochemBioPhys，2001，389(1)：77—83．[50]ReichardJF,DoomJA，SimonF,eta1．CharacterizationofmultidrugresistanceassociatedProtein2inthehePatocellulardisPositionof4-hydroxynonenal[J]．ArchBiochemBioPhys，2003，411(2)：243—250．【5l】AwasthiS,SharmaR，SinghalSS，eta1．RLIP76，anoveltransPortercatalyzingATP—dePendenteffiuxofxenobiotics[J】．DrugMetabDisPos，2002，30(12)：1300—1310．[52]EsterbauerH，SchaurILl，ZollnerH．Chemistryandbiochemistryof4一hydroxynonenal，malonaldehydeandrelatedaldehydes[J]．FreeRadicBiolMed,1991，11(1)：81—128．[53]StrohmaierH，Hinghofer-SzalkayH，SchaurRJ．Detectionof4-hydroxyn彻enal(HNE)asaPhysiologicalcomPonentinhumanPlasma[J]JLiPidMediatCellSignal，1995，11(1)：51-61．[54]于晨辉，杜仲燕，高佳，等．4一HNE通过抑制TNF一Ⅱ介导的NF—KB活化诱导酒精性肝损伤【J]．中国病理生理杂志，2013，06：1046—1052．【55】KarlhuberGM，BauerHC，EcklPM，eta1．Cytotoxicandgenotoxiceffectsof4-hydroxynonenalincerebralendothelialcell[J]．MutatResearch，1997，381(2)：209—216．【56】KirkhamPA，SPoonerG,Ffoulkes—JonesC，eta1．CigarettesmoketriggersmacroPhageadhesionandactivation：roleofliPidPeroxidationProductSandscavengerrecePtor[J]．FreeRadBiolMed,2003，35(7)：697—710．【57】JiC，ArnarnathV,eta1．4一HydroxynonenalinducesaPoPtosisviacasPase一3activation41 万方数据泰山医学院硕士学位论文andcytochromeCrelease[J]．ChemResToxicol，2001，14(8)，1090—1096．[58]ChenCH，BudasGR，ChurchillEN，eta1．Activationofaldehydedehydrogenase2reducesischemicdamagetotheheart[J】．Science，2008，321(5895)：1493—1495．[59】BudasGR，DisatnikMH，Mochly—RosenD．Aldehydedehydrogenase2incardiacProtection：AnewtheraPeutictarget[J]．TrendsCardiovascMed,2009，19(5)：158—164．[60】ChenZ，ZhangJ,StamlerJS．Identificationoftheenzymaticmechanismofnitroglycerinbioactivation[J]．ProcNatlAcadSciUSA，2002，99(12)：8306—8311．[61]孙华林．乙醛脱氢酶2基因多态性与脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块形成的相关性[J】．山东大学学报(医学版)，2012，07：65．67+73．【62]KitamuraA，IsoH，ImanoH，eta1．CarotidintimamediathicknessandPlaquecharacteristicsasariskfactorforstrokeinJaPaneseelderlymen[J]．Stroke，2004，35(12)：2788--2794．[63】HollanderM，BotsML，DelSolAI，eta1．CarotidPlaquesincreasetheriskofstrokeandsubtyPesofcerebralinfarctioninasymPtomaticelderly：theRotterdamstudy[J]．Circulation，2002，105(17)：2872—2877．[64】HennericiMGTheunstablePlaque[J]．CerebrovascularDiseases，2004，17(SuPPI31：17—22．[65]RobertsCK，SindhuKK．Oxidativestressandmetabolicsyndrome[J]．L／feScience，2009，84：705—712．[66]AdibhatlaRM，HatcherJF．PhosPholiPaseA(2)，reactiveoxygensPecies，andliPidPeroxidationinCNSPeroxidationinCNSPathologies[J]．BMBReP，2008，41：560—567．[67]郭亦杰．DDAHl和ALDH2基因多态性与高血压及冠心病易感性的关联关系及机制研究[D]．中南大学，2010．【68]SekiT,OkayamaH，IsoyamaS，eta1．Theroleofalcoholdehydrogenase2andaldehydedehydrogenase29eno—tyPesinalcoholinducedvasosPasticangina[J]．乃胁砌JExPMed,1999．187(4)：311-322．[69】NishimuraFT,FukunagaT,KajiuraH，eta1．Effectsofaldehydedehydrogenase一2genotyPeoncardiovascularandendocrineresPonsestoalcoholinyoungJaPanesesubjects[J]．／tutonNeurosci，2002，102(1—2)：60—70．[70】TakagiS，1waiN，YamauchiR，eta1．Aldehydedehydrogenase2geneisariskfactorformyocardialinfarctioninJaPanesemen[J]．HyPertensResearch，2002，25(5)：677—681．[71】JoSA，KimEK，ParkMH，eta1．AGlu487LysPolymorPhisminthegeneformitochondrialaldehydedehydrogenase2isassociatedwithmyocardialinfarctionin44 万方数据泰山医学院硕士学位论文elderlyKoreanmen[J]．ClinChimAcla，2007，382(1-2)：43—47．【72]OhsawaI，KaminoK，NagasakaK，eta1．GeneticdeficiencyofamitochondrialaldehydedehydrogenaseincreasesserumliPidPeroxidesincommunity—dwellingfemales[J]．HumGenet，2003，48(8)：404—409．[73]毛根年，李鑫，瞿建波．乙醛脱氢酶及其医疗领域研究进展[J】．天然产物研究与开发，2011,23：193．[74]WojciechJ,EmiliaK，MagdalenaLD，eta1．AlcoholDehydrogenase(ADH)andAldehydeDehydrogenase(ALDH)asCandidatesforTumormarkersinPatientswithPancreaticCancer[J]．GastrointestinLiverDts，2011,20：255．[75】DakeishiM，MurataK，SasakiM，eta1．Associationofalcoholdehydrogenase2andaJdehydedehydrogenase2genotyPeswithfastingPlasmaglucoselevelsinJaPanesemaleandfemaleworkers[J]AlcoholAlcohol，2008，43(2)：143-147．[76】FreibergMS，SametJH．Alcoholandcoronaryheartdisease：theanswerarandomizedcontroltrail[J]．Circulation，2005，112(10)：1379—1381．45 万方数据泰山医学院硕士学位论文综述药物代谢酶遗传多态性对合理用药的指导意义周青1综述刘卫2审校1．泰山医学院201l级研究生，泰安，271000；2．解放军88医院药剂科泰安，271000．摘要：随着药物基因组学的日趋成熟，个体化用药已成必然。根据药物代谢酶的基因多态性指导合理用药的意义日益凸显，特别是细胞色素P450酶系、药物代谢转移酶、乙醛脱氢酶的多态性在合理用药中的意义更应引起足够重视。关键词：个体化用药；细胞色素P450酶系；药物代谢转移酶：乙醛脱氢酶；多态性在医疗实践中经常见到与遗传有关的疾病，如色弱、色盲、高血压、糖尿病等。不仅如此，对一些食物的反应有时也有家族遗传的特点，例如海鲜过敏，容易醉酒等。其实，机体对药物的反应有的也是遗传的，但人们接触药物的机会远远小于接触食物的机会，所以对药物反应的遗传特性常常被忽略。近年来，随着人们对医疗质量需求的提高，治疗上的量体裁衣，一人一方，也就是用药的个体化越来越受到重视，这客观上要求医生应该了解患者的药物遗传特征，以便利用遗传药理学知识高质量地指导合理用药。在药物动力学和药效学的各个环节上，药物从吸收到产生作用要涉及转运体、酶、受体等多种蛋白，而表达蛋白的DNA有时发生了基因突变，表达了没有完全作用或完全没有作用的蛋白。这种可以遗传的基因突变(也就是基因多态性)导致了同一药物对不同家族的人的作用不尽相同，因而显示出药物遗传学特征【11。例如，在药物吸收环节，P糖蛋白的多态性可导致地高辛血药浓度的明显差异【2】；在药物作用环节上，胰岛素受体的多态性导致相同剂量药物使不同人血糖水平有明显差异‘31，阿片受体的多态性导致吗啡对不同人镇痛效果不同【41。目前，研究的比较深入的是在药物代谢环节，药物代谢酶的遗传多态性使同一药物在不同个体上的代谢速率快慢不一，表现出不完全相同的作用和不良反应，这为正确指导病人合理用药提供了依据【5。7】。1细胞色素P450酶(CYP)系的基因多态性与合理用药在编码CYP的基因超家族中，至少有编码CYPl---CYP3的基因家族群与药物代谢密切相关【8】o1．1CYPlCYPlA2参与了人体摄入量99％以上的氨苯蝶啶的代谢，90％的褪黑素、咖啡因也是由CYPlA2进行的例。CYPlA2的多态性意味着这些药物血药浓度的不同和作用46 万方数据泰山医学院硕士学位论文时间的改变，这至少能在部分程度上解释氨苯蝶啶的利尿作用对不同的人的效果并不相同。同样，老年人服用褪黑素改善睡眠时，在慢代谢型的个体就特别有效，而在快代谢型的个体由于所服用的褪黑素很快在酶的作用下发生羟基化而失去作用，往往效果一般甚至无效。咖啡因是咖啡的主要成分，社区里常见有的家庭习惯于喝咖啡，而另外家庭的人喝一点咖啡就能很长时间睡不好，这表明不同的人对咖啡因的耐受程度和代谢能力是不一样的。事实上，研究中经常把咖啡因用作探针药，以测定机体CYPlA2的活性⋯。1．2CYP2在CYP2家族中，CYP2C是最大的亚家族【I¨。根据CYP2C9和CYP2C19的多态性种类，通常分为快代谢型(野生纯合子)、中间代谢型(杂合子)、慢代谢型(突变纯合子)型。其中，CYP2C9的底物有苯妥英钠、华法林、甲苯磺丁脲、格列吡嗪、洛沙坦等‘121，CYP2C19的底物有地西泮、奥美拉唑等【131。作为控制癫痫发作的药物，苯妥英钠的治疗剂量和中毒剂量比较接近，中毒症状和癫痫的疾病症状有的也很相似，在有代谢速度差异的情况下，更需格外谨慎。特别是慢代谢病人，即使按正常剂量和正常间隔用药，也可导致中毒，可见弄清楚癫痫病人的CYP2C9代谢型对于正确使用苯妥英钠是很重要的。华法林常用作测定CYP2C9活性的探针，因为CYP2C9参与大部分华法林的羟基化代谢。甲苯磺丁脲、格列吡嗪、洛沙坦则不同，可以分别用血糖水平和降压效果为指标调整给药剂量。地西泮在正常人体内的半衰期长达48小时，在慢代谢病人体内其半衰期会更加延长，此时应减少给药剂量并延长给药间隔，否则，病人更容易有宿醉现象。奥美拉唑对于慢代谢型病人的抑酸效果要优于快代谢病人，对于快代谢病人可适当增加剂量以取得更好的抑酸效果，对于慢代谢病人适当减少剂量可降低用药成本也减轻一些不良反应。几种药物作为同一代谢酶的共同底物，配伍使用势必形成对酶的竞争而减慢各自的代谢。地西泮和奥美拉唑是CYP2C19的共同底物，对于睡眠不良的反流性食管炎病人，两药联用的机会很大，这时适当减少各自的剂量仍能达到治疗目的，特别是对于慢代谢病人，更是如此。但结构相似的同一类药物未必经过相同的酶代谢，例如，他汀类药物通过羟甲基戊酸途径抑制胆固醇合成，是一类结构功能相似的调血脂药。如氟伐他汀可通过CYP3A4及CYP2C9代谢，而洛伐他汀、辛伐他汀及阿托伐他汀则主要通过CYP3A4代谢，但瑞舒伐他汀、普伐他汀、匹伐他汀不经或少量经CYP酶系统代谢。这种代谢途经的差异是这些药物作用和不良反应差异的原因之一。也有47 万方数据泰山医学院硕士学位论文的药物同时经两种或多种酶代谢。例如，对乙酰氨基酚既是CYPlA2的底物也是CYP2E1的底物。其中任何一种酶的多态性都能改变对乙酰氨基酚的代谢，所以对乙酰氨基酚药效的个体差异较大。抗抑郁药丙咪嗪也有类似情况，去甲基化代谢由CYP2C19催化，而羟基化代谢则由CYP2D6催化，这两种酶都存在基因多态性，所以口服丙咪嗪后，原药和代谢物的稳态浓度、疗效和不良反应都存在明显的个体差异。有的前体药物需要经机体代谢刁‘有药效，此时，药物对慢代谢型病人的疗效降低甚至无效。例如，氯吡格雷是心脏支架术后病人需长期服用以防止血栓形成的药物，它吸收入血后约85％由酯酶水解为无活性的羧酸衍生物，只有15％的部分作为前体药物由CYP2C19、CYPlA2和CYP286氧化先形成2．氧一氯吡格雷，然后进一步氧化代谢成为一个带有羧基和巯基的活性代谢物(R130964)发挥抑制血小板凝聚的作用。对于CYP2C19变异的慢代谢病人，R130964的生成明显降低，形成氯吡格雷抵抗，容易再次发生心梗。有趣的是，吸烟能显著诱导CYP2C19的活性，对于中间代谢型的病人，吸烟可避免氯吡格雷抵抗。对于常规使用氯吡格雷的快代谢型病人，吸烟可导致出血倾向【14】。CYP2D6是13受体阻滞剂(美托洛尔、普萘洛尔、噻吗洛尔)、抗心律失常药(普罗帕酮、美西律)、抗精神病药(氟哌啶醇、奋乃静、利螺环酮)、抗抑郁药(丙咪嗪、阿米替林、帕罗西丁)和镇痛药(右美莎芬、可待因)等的代谢催化酣15】。以美托洛尔为例，其羟基化代谢由CYP2D6催化，CYP2D6的基因多态性可导致美托洛尔明显的个体差异。慢代谢型病人的血药浓度和消除半衰期都明显高于快代谢病人，慢代谢病人每天一次美托洛尔就足以控制心绞痛发作，但也比较容易诱发哮喘等不良反应。美托洛尔羟基化代谢多态性为常染色体隐性遗传，在白种人和黄种人的变异率(分别为30／0--9％和0．50／o---1％)有种族差异。又如麻醉镇痛药可待因，其药效和药代都存在明显的个体差异。可待因在体内主要通过与葡萄糖醛酸结合反应和氧一或氮一去甲基化两种途径代谢。其中，氧一去甲基化反应由CYP2D6催化生成吗啡。由于CYP2D6的基因多态性，慢代谢病人可待因的血药浓度高于快代谢病人，但代谢物吗啡的浓度低于快代谢病人。1．3CYP3CYP3A4和CYP3A5的基因多态性是比较重要的一类，因为CYP3A4和CYP3A5参与大约50％的临床常用药物的代谢，如他克莫司、环孢素、红霉素、阿普唑仑、硝苯地平等【l61。其中，免疫抑制剂是器官移植术后病人需长期使用的一类药物，弄清其 万方数据泰山医学院硕士学位论文代谢酶的基因多态性对指导病人合理用药就显得特别有意义。CYP3A5的野生型基因CYP3A5*l不影响体内代谢酶的表达，但突变型基因CYP3A5*3能够导致体内代谢酶表达下降，从而导致他克莫司血药浓度的升高，以及较低的持续给药剂量需求。有文献报道【17】，CYP3A5基因多态性与肾移植受体长期使用他克莫司的疗效以及使用他克莫司后引起的药物相关性肾毒性之间也存在着一定联系。另一免疫抑制剂西罗莫司的代谢也与CYP3A5有关，CYP3A5*l型的病人的服用西罗莫司后，血药浓度与剂量比值较低，对应的也就需要更大药物剂量来达到有效的血药浓度‘18】。2药物代谢转移酶的基因多态性与合理用药药物代谢转移酶包括：乙酰转移酶、甲基转移酶、葡萄糖醛酸转移酶、S转移酶等，是人体重要的II相药物代谢酶。2．1乙酰转移酶N一乙酰转移酶(NAT)能够催化芳香胺和杂环脓的乙酰化反应，目前已经确定了两种NAT同工酶：NATl和NAT2。NATl和NAT2都表现出遗传多态性，NATl多态性对药物疗效、毒副作用甚至肿瘤发生都有重要影响‘191。NATI*4为野生型，表现为正常的代谢活性，NATl宰10和NATl宰11表现为快代谢活性，其余均为慢代谢活性。例如，异烟肼引起的神经毒性与NAT多态性相关【20】。体内异烟肼主要由NAT2代谢，代谢产物为乙酰异烟肼。NAT2具有遗传多态性，并且可以将携带者分为强代谢者和弱代谢者。NAT弱代谢者减少异烟肼的代谢并且延长药物在体内的滞留时间，从而导致外周神经病变。然而强代谢者能迅速转化异烟肼从而避免异烟肼引起的神经毒性。2．2甲基转移酶巯嘌呤甲基转移酶是硫唑嘌呤、6一巯基嘌呤等嘌呤类药物代谢过程中的重要代谢酶，具有遗传多态性川。在人群中89％酶活性较高，11％为酶活性较低，0．33％为酶活性缺陷者。巯嘌呤甲基转移酶活性与上述嘌呤类药物的治疗效果及主要不良反应骨髓抑制密切相关，对于酶活性缺陷的个体使用巯嘌吟可导致严重的骨髓抑制。有些医疗机构对使用嘌呤类药物的患者进行巯嘌呤甲基转移酶活性及基因型检测，以提高药物治疗效果，避免严重不良反应。2．3葡萄糖醛酸转移酶尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶WGT)是许多内源性和外源性物质在生物体内进行II相生物转化时重要的一种酶，可以把亲脂性底物转化为水溶性葡萄糖醛酸，从而49 万方数据泰山医学院硕士学位论文利于随尿、胆汁和粪便排出体外。根据编码氨基酸的同源性，UGT超基因家族可分为UGTl和UGT2两个大家族。其中，UGTIAl参与伊立替康的代谢：作为前药的伊立替康经羧酸酯酶转化为强效的活性部分SN一38(7一乙基．10一羟基一喜树碱1【221。SN一38在肝中通过与UGTlAl结合生成SN一38一葡糖苷酸(SN38G)后经胆汁分泌而解毒。UGTlAl的活性和基因表达是决定肿瘤组织对伊立替康敏感性的重要因素之一。UGTlAl具有遗传多态性，分为快代谢型和慢代谢型。常规用药时，后者可致SN．38堆积导致严重不良反应。有的制药企业已能为使用本企业伊立替康的患者提供UGTlAl基因多态性检测工作。2．4S转移酶谷胱甘肽一S一转移酶(GST)基因多态性会影响化疗药物的疗效。例如，GSTPl基因多态性与顺铂为基础化疗方案治疗晚期胃癌疗效有相关性，突变基因型对化疗较的敏感是野生基因型的3．2倍【23】。3乙醛脱氢酶的基因多态性与合理用药乙醛脱氢酶(ALDH)是酒精代谢为乙醛后乙醛氧化生成乙酸的主要酶。目前已有19种乙醛脱氢酶基因被鉴定，其中ALDH2是其家族中醛类代谢活性最强的同工酶【241。人群中该酶基因型的多态性有3种情况：具有正常催化活性的野生纯合子型ALDH2*111，活性下降的杂合子型ALDH2*1／2(约为正常ALDH2活性的6．25％)，催化活性失去的突变纯合子型ALDH2木2。具有ALDH2*1／2或ALDH2*2基因型的人群是酒精慢代谢或不代谢型，这些人饮酒后常由于ALDH2活性丧失引起乙醛的积累和代谢障碍从而导致脸红、血压升高、呕吐等不良反应。最近发现ALDH2参与心脏保护作用，激活ALDH2降低了心脏、血管的缺血性损伤，因而ALDH2作为心脑血管疾病的新的生化标志物而引起重视。所以，检测ALDH2的基因型不仅能说明该个体的饮酒能力，而且也有利于心脑血管疾病的早期发现和确诊。在药物方面，ALDH2参与硝酸甘油等含有多个羟基的药物的代谢【251。具有ALDH2*1／2或ALDH2*2基因型的人也是硝酸甘油的慢代谢或不代谢的个体，在这些个体上，硝酸甘油的不良反应如面色潮红，头疼等更加常见，而且，由于代谢受阻，硝酸甘油不能催化生成NO，其扩血管的作用也大打折扣而不能发挥药效。所以，检测ALDH2基因型对合理使用硝酸甘油也是很有意义的。4结语药物代谢酶检测的意义不仅仅是根据其基因多态性指导合理用药，因为这些酶50 万方数据泰山医学院硕士学位论文的基因多态性与许多疾病的发生密切相关。例如，致癌物(多环芳烃、黄曲霉毒素B1、芳香胺和杂环胺等)在体内的激活过程主要在CYP1A2催化下逐步形成羟胺、N一乙酰氧酯等，它们都是具有DNA毒性的致癌物质。因此，CYPIA2活性较高的个体在接触环境致癌物后，体内活性致癌物的浓度有可能会明显升高，从而增加癌症的发生率。同样，对于消化道内的外源性致癌物质也在药物代谢酶如CYP2C9或CYP2C19的作用下去毒，代谢为无毒的物质并加速这些物质的排泄，所以CYP2C9或CYP2C19活性高的个体罹患消化道肿瘤的机会可能低于突变型的个体。药物代谢酶的基因多态性与疾病的关系是目前流行病学研究的热点之一，有的医院和制药企业已经能为病人提供相关药物代谢酶的基因型检测工作，也有的公司专门研发了针对某种代谢酶的检测试剂盒。这些都为进一步明确药物代谢酶基因多态性与疾病和药物的关系提供了保证。参考文献：[1】Mega儿，CloseSL，WiviottSD，eta1．CflochomeP450geneticPolymorPhismsandtheresponsetoPrasugrelrelationshiPtoPharmacokinetic，Pharmacodynamic，andclinicaloutcomes[J]．Circulation，2009，119，2553—2560．【2】2MayerU，WagenaarE，BeijnenJH，eta1．SubstantialexcretionofdigoxinviatheintestinalmucosaandPreventionoflongtelmdigoxinaccumulationinthebrainbythemdrlaP-glycoProtein[J]．BritishJournalofPharmacology，2012，119，1038—1044．【3】3LinTC，YenJM，GongKB，eta1．AbnormalglucosetoleranceandinsulinresistanceinPolycysticovarysyndromeamongsttheTaiwanesePoPulation—notcorrelatedwithinsulinrecePtorsubstrate一1Gly972Arg／Ala513ProPolymorPhism[J]．BMCMedicalGenetics，2006，7，36．【4】4KolesnikovY,GabovitsB，LevinA，eta1．Combinedcatechol—O—methyltransferaseandl上-oPioidrecePtorgenepolymorPhismsaffectmorphinePostoPerativeanalgesiaandcentralsideeffects[J]．Anesthesia＆Analgesia，2011，112，448—453．[5】TilakAV,IyerSN，MukherjeeMS，eta1．Full—Gene—SequencingAnalysisofN—Acetyltrans—ferase一2inanAdultIndianPoPulation[J]．GeneticTestingandMolecularBiomar恕rs,2012．【6】CascorbiI．PharmacogeneticsofPhaseIIDrugMetabolizingEnzymes[J]．Pharmacoge—neticsandIndividualizedTheraPy，2012，81-100．[7]BochudM，BurnierM，GuessousI．ToPThreePharmacogenomicsandPersonalizedMedicineAPPlicationsattheNexusofRenalPathoPhysiologyandCardiovascular5l 万方数据泰山医学院硕士学位论文Medicine[J]．CurrentPharmacogenomicsandPersonalizedMedicine，2011,9，299—322．[8】HiratsukaM．InvitroassessmentoftheallelicvariantsofcytochromeP450[J]．DrugMetabolismandPharmacokinetics，2012，27(1)：68—84．[91YoshimotoK，EchizenH，ChibaK，eta1．IdentificationofhumanCYPisoformsinvolvedinthemetabolismofProPranololenantiomers．．N．．desisoProPylationismediatedmainlybyCYPlA2[J]．BritishJournalofClinicalPharmacology，2012，39，421—431．[10】BertilssonL,CarrilloJ,DahlM，A．eta1．Benitez．ClozaPinedisPositioncovarieswithCYP1A2activitydeterminedbyacaffeinetest[J]．BritishJournalofClinicalPharmac—ology，2012，38，471—473．[11】HolsteinA，BeilW,KovacsECYP2Cmetabolismoforalantidiabeticdrugs。imPactonPharmacokinetics，druginteractionsandPharmacogeneticasPects[J]．ExPertOPiniononDrugMetabolism＆Toxicology，2012，8，1549—1563．【12】SconceEA，KhanTI，WynneHA，eta1．TheimPactofCYP2C9andVKORC1geneticPolymorPhismandPatientcharacteristicsuPonwarfarindoserequirements：ProPosalforanewdosingregimen[J]．Blood,2005，106，2329—2333．[131SerranoD，TorradoS,Yorrado—SantiagoS，eta1．TheinfluenceofCYP2C19geneticPolymorPhismonthePharmacokinetics／PharmacodynamicsofProtonPum-Pinhibitor—containingHelicobacterPyloritreatments[J]．CurrentDrugMetabolism，2012，13(9)，1303．1312．[14】Par6G,MehtaSR，YusufS,eta1．EffectsofCYP2C19genotyPeonoutcomesofcloPidogreltreatment[J]．NewEnglandJournalofMedicine，2010，363，1704—1714．[15】Mar6chalJD，KemPC,RobertsG,eta1．WolfandM．Sutcliffe．InsightsintodrugmetabolismbycytochromesP450frommodellingstudiesofCYP2D6一druginteractio—ns[J]．BritishJournalofPharmacology，2009，153，$82-$89．[16]AnglicheauD，LegendreC，BeauneP,eta1．CytochromeP4503APolymorPhismsandimmunosuPPressivedrugs：anuPdate[J]．Pharmacogenomics，2007，8，835—849．【17】RoH，MinSI，YangJ,eta1．ImPactofTacrolimusIntraindividualVariabilityandCYP3A5GeneticPolymorPhismonAcuteRejectioninKidneyTransPlantation[J]．TheraPeutic所喈Monitoring，2012，34，680—685．[18】LukasJC，CalvoR,ZografidisA，ela1．SimulationofsirolimusexPosuresandPoPulationvariabilityimmediatelyPostrenaltransPlantation：imPortanceofthePatient'sCYP3A5genotyPeintailoringtreatment[J]．BioPharmaceutics&DrugDisPosition，2010，3l，129—137．[19]CaiJ,ZhaoY,ZhuCL，eta1．TheassociationofNAT1PolymorPhismsandcolorectal52 万方数据泰山医学院硕士学位论文carcinomarisk：evidencefrom20，000subjects[J]．MolecularBiologyRePor曲，2012，39(7)，7497—7503．[20]Kinzig—SchiPPersM，Tomalik—ScharteD，JetterA，eta1．ShouldweuseN—acetyrltransfer—asetyPe2genotyPingtoPersonalizeisoniaziddoses?[J]AntimicrobialAgentsandChemotheraPy，2005，49，1733—1738．[21]StoccoC‘YangW,CrewsKR，eta1．PACSIN2PolymorPhisminfluencesTPMTactivityandmercaPtoPurinerelatedgastrointestinaltoxicity[J]．HumanMolecularGenetics，2012，2I(21)，4793—4804．【22】C6t6JF,KirzinS,KramarA，eta1．UGT1A1PolymorPhismcanPredicthematologictoxicityinPatientstreatedwithirinotecan[J]．ClinicalCancerResearch，2007，13,3269—3275．[23]LiQF，YaoRY,LiuK，eta1．GeneticPolymorPhismofGSTPI：PredictionofclinicaloutcometooxaliPlatin／5一FU—basedchemotheraPyinadvancedgastriccancer[J]．Jour—nalofKoreanMedicalScience，2010，25，846—852．[24】HurleyTD，EdenbergHJ．GenesEncodingEnzymesInvolvedinEthanolMetabolism[J】一lcoholResearch—CurrentReviews，201I，34，339．[25]SunL，FerreiraJC，Mochly—RosenD．ALDH2activatorinhibitsincreasedmyocardialinfarctioninjurybynitroglycerintolerance[J]．ScienceTranslationalMedicine，201l，3(107)，107—111．53 万方数据泰山医学院硕士学位论文致谢三年硕士研究生的学习即将结束，蓦然回首，感慨万千。我要感谢这段人生中所有关心帮助过我的老师、同学、亲友们，你们是我人生最宝贵的财富。首先感谢我的导师刘卫老师。导师博学多才、思维开阔、做事雷厉风行、性格直率，三年学习期间，不仅授人以鱼，还授人以渔。感谢导师的指导和教诲，令我在三年学习期间受益匪浅，三年来，我取得的每一次进步都离不开老师的谆谆教导和鼓励，导师敏锐的科研思维、严谨的治学态度，渊博的知识是我学习的榜样。正是由于这样的授业恩师使我勇于克服困难，面对挑战，老师真诚的关怀将一直温暖和照耀我的人生。感谢泰山医学院药学院高允生教授、叶文静老师对本课题的指导。感谢泰安市88医院药剂科的所有工作人员以及我读研期间的所有同学。祝愿各位家庭美满、心想事成。感谢泰山医学院研究生部和2011级硕士研究生全体同学在我学习和生活中给予的关怀和帮助。特别感谢我的家人自始至终都在支持我，给我坚强的后盾。祝我的家人们永远幸福安康。纸短恩长，还有太多要感谢的人无法一一列举，在此一并表示衷心感谢，相信因为你们的陪伴和支持，我的人生会更加精彩154 万方数据泰山医学院硕士学位论文攻读学位期间发表的学术论文1、周青，彭净，刘卫．泡腾制剂技术的研究进展[J】．中国药房，2014，13：1231—1233．2、周青，刘卫．药物代谢酶遗传多态性对合理用药的指导意义，实用医药杂志，已录用． 万方数据泰山医学院硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：Et期：z2竿：五-J岁关于学位论文使用授权的声明本人完全了解泰山医学院有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权泰山医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)敝储虢蹲聊签丝嗍趔竺彩。多