两型性莱氏野村菌交替氧化酶(aox)基因的克隆与功能分析

《两型性莱氏野村菌交替氧化酶(aox)基因的克隆与功能分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、重庆大学硕士学位论文该基因的高度上调表达，H2O2处理后Nraox表达量是对照组的7倍，甲萘醌处理后是对照组的20倍。③抑制剂处理对交替氧化酶功能的验证采用交替氧化酶的特殊抑制剂SHAM处理后，检测细胞内过氧化氢含量变化，结果显示，与对照组相比，抑制剂SHAM处理后前10min中内细胞内H2O2较高，处理15min后没有明显变化；但是，显微观察菌丝形态发现与对照组相比，处理组菌丝表现为弯曲和很多芽状结构的不正常生长状态；而诱导培养基中的微菌核表现为微菌核的形成延迟、微菌核颗粒直径较大以及微菌核结构松散、表面比较蓬松。由此可以确定，抑制剂处理后减缓了细胞内过氧化氢的清除速

2、度，并对细胞产生了一定的氧毒害。④RNA干扰技术验证Nraox基因功能利用RT-qPCR技术对不同浓度siRNA的干扰效率进行检测，结果显示800nMsiRNA能够有效下调Nraox基因的表达，并且该基因表达量下调了约76.1%。与对照组相比，干扰菌株在含有胁迫诱导剂的固体SMAY培养基上生长时，菌落生长缓慢，菌落变小，产孢量降低。而在微菌核诱导培养基AM中生长时，Nraox基因干扰后的微菌核表型发生了明显变化，主要表现为：与野生菌相比，微菌核的形成推迟，微菌核颗粒的直径变大，质地较为疏松；微菌核的生物量和产量显著性降低；显微观察发现相对于对照组，干扰后的莱氏野村菌菌丝

3、显示畸形生长，表现为菌丝上生出很多芽状结构；这些结果表明，Nraox参与了莱氏野村菌微菌核的形成调控。⑤干扰菌株对靶标害虫的致病性鉴定采用点滴法测定干扰菌株微菌核对三龄斜纹夜蛾幼虫的侵染和致病能力，结果发现，干扰菌株相对于野生型菌株对斜纹夜蛾幼虫的致死率下降，半致死时间LT50显著增长，较野生菌株LT50增加26.2%。结论：首次克隆得到莱氏野村菌的交替氧化酶基因，并命名为Nraox。研究了该基因在莱氏野村菌菌丝生长、微菌核的形成、产孢、毒力和氧胁迫等方面的作用，结果表明Nraox通过调节细胞内的氧化还原平衡和菌丝生长来影响莱氏野村菌微菌核的形成、影响到莱氏野村菌产孢，

4、并且在微菌核的毒力方面Nraox也起一定的作用。关键词：莱氏野村菌，微菌核，Nraox，氧胁迫，RNA干扰II英文摘要ABSTRACTEntomogenousfungiwillnotcauseenvironmentalpollution,residualandresistanceincontrolofinsectpests,whichisakindofenvironmental-friendlyfungalpesticides.Aspeoleofenvironmentalprotectionawarenessenhancement,theresearchofenviro

5、nment-friendlypesticidesiswidelystrengthened.Nomuraearileyicannatueallyinfectavarietyofinsectpestsanddomainepidemicinthefield,soitisanimportantentomopathogenicfungi.Asanimportantpesticide,theconidiaaretheactiveingredient.However,itssporulationrequiresfastidiousgrowthconditions,whichlimit

6、itsmasscommercializationandapplication.Therefore,itneedstofindeasy-to-scaleproductionofeffectivepropagulestoinsteadofconidiospore.Liquidsporesbecauseitscellwallisthin,lowtoxicityandstoragecannotbeusedinproduction.Microsclerotium(MS)isapseudoparenchymaformedbypigmented,compactaggregationo

7、fhyphaewhichishighlyresistanttodesiccation,strongresistance,inasuitableenvironmenttohyphaandspore.Microsclerotium(MS)ofN.rileyihadbeensuccessfullyaccomplishedbyliquidamendedmedium(AM).Theresistanceandstabilityofmicrosclerltiacanactaspropaguleswithstandadverseenvironmentan