捕食线虫性真菌的分离鉴定及高效菌株的筛选

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1、分类号：密级：学号：2010108040单位代码：10759石河子大学硕士学位论文捕食线虫性真菌的分离鉴定及高效菌株的筛选学位申请人王为升指导教师孟庆玲副教授申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称预防兽医学研究方向分子寄生虫学所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2013年6月IsolationandIdentificationofNematode-trappingFungiandScreeningofHigh-performanceStrainsADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmento

2、ftheRequirementsFortheDegreeofMasterofAgricultureByWANGWeisheng(PreventiveVeterinaryMedicine)DissertationSupervisorProf.MengQinglingShihezi·Xinjiang·ChinaJune，2013项目资助（1）项目名称：少孢节丛孢菌侵染线虫分泌性蛋白功能新基因研究；国家自然科学基金（31260601）；（2）项目名称：少孢节丛孢菌捕食相关功能基因的克隆与表达研究；农业公益行业专项子课题（201303037-5）；（3）项目名称：绵羊消化道线虫

3、病新型生物防控制剂研究；兵团博士基金（2010JC09）；中文摘要家畜消化道线虫长期寄生在动物体内，消耗家畜的营养、对肠道造成机械性损伤而降低饲料报酬，导致家畜生长缓慢、消瘦，畜产品的产量、质量下降等，引起严重的经济损失，对畜牧业生产的危害极大。目前，家畜消化道线虫病的防治主要依赖于化学药物，长期应用化学药物不仅导致虫体产生耐药性，而且还造成药物残留和环境污染，严重危害人类健康。作为线虫的天敌，捕食线虫性真菌是一类重要的线虫自然控制因子。国外的研究证实，捕食线虫性真菌可用于家畜消化道线虫病的防控，是一种有前景的动物—环境友好型疫病防控方法。然而，我国对捕食线虫性真菌的研

4、究相对滞后，目前急需开展捕食线虫性真菌的分离鉴定及其生物学特性等基础性研究工作。为了研发动物消化道线虫病的新型防控生物制剂，本研究对新疆天山北坡牧场土壤样本中捕食线虫性真菌进行了分离、鉴定，测定了分离株的捕食线虫活性和通过动物消化道能力，筛选出能够高效捕杀家畜消化道线虫高效菌株，为本地区家畜消化道线虫病的生物防控奠定基础。研究方法和主要结果如下：1、新疆天山北坡牧场捕食线虫性真菌的分离鉴定：采用微生物学和寄生虫学实验技术，并通过捻转血矛线虫三期幼虫（HaemonchuscontortusL3）诱导对新疆天山北坡牧场土壤样本中捕食线虫性真菌进行了分离、形态学及分子生物学鉴

5、定并初步对其捕食活性进行了研究。结果成功分离出了26株捕食线虫性真菌，其中9株的孢子梗直立、单生、分隔；分生孢子双孢、椭圆形；以粘性三维菌网捕捉线虫。其形态学特征符合少孢节丛孢菌(Arthrobotrysoligospora)。利用PCR技术扩增分离株5.8srDNA-ITS2基因序列，测序后与国内外已知少孢节丛孢菌菌株对比分析，结果分离株与Arthrobotrysoligosporaisolate128香港分离株同源率最高，达到99.69%。进一步证明所分离的捕食线虫性真菌为少孢节丛孢菌。2、少孢节丛孢菌的捕食过程观察及不同条件下对H.contortusL3捕食活性的

6、测定：利用倒置显微镜跟踪观察了少孢节丛孢菌对捻转血矛线虫的捕食过程；测定了少孢节丛孢菌在不同营养浓度(0.0g/L，0.2g/L，0.4g/L，0.6g/L，0.8g/L，1.0g/L，2.0g/L)、环境温度(5℃，10℃，15℃，20℃，25℃，30℃，35℃)及不同幼虫条数(500，1000，2000，3000，4000，5000)条件下的捕食活性。结果显示：①加入H.contortusL36h后开始出现捕食结构；8h后形成简单的捕食性三维菌网；12h时，捕食性结构继续发展，发育成为成熟三维菌网状。②当营养浓度为0.4g/L、环境温度为20℃和幼虫含量达到3000

7、条时，分离株对捻转血矛线虫的捕食率达到最大值，分别为85.25%、89.90%和93.23%。表明所分离的9株少孢节丛孢菌的捕食活性在一定范围内随着营养浓度和环境温度的升高而呈现先增加后减少，并随着幼虫含量的增加而呈现先增加后保持高水平不变的规律性变化。3、少孢节丛孢菌对粪便中线虫的捕食率及通过绵羊消化道后的捕食能力研究：利I用在粪便中加入定量线虫，作用一段时间后回收残余线虫的方法，测定了所分离的9株少孢节丛孢菌对绵羊粪便中捻转血矛线虫幼虫的捕食率和将少孢节丛孢菌分生孢子灌服绵羊后对粪便中线虫幼虫的捕食率。结果显示，A-XJ1菌株的捕食活