线粒体融合蛋白2对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠骨骼肌脂肪代谢的影响

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1、目录IIILIIIIIIIIII11111IIIIIIY2337579中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5研究论文线粒体融合蛋白2对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠骨骼肌脂肪酸代谢的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9刖吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24多日刁≮⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

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3、脂肪酸代谢的影响摘要胰岛素抵抗(InsulinResistance，IR)是指外周组织(骨骼肌、脂肪和肝脏)对胰岛素的敏感性降低，表现为外周组织对葡萄糖的摄取和利用障碍。近年来研究认为，骨骼肌组织内脂代谢中间产物如甘油二酯、神经酰胺、长链脂酰辅酶A的沉积增加是诱导骨骼肌产生IR的主要原因。脂肪酸是人及哺乳动物的主要能源物质，脂肪酸的摄入超出其氧化能力是骨骼肌内脂肪堆积的主要原因。脂肪酸转位酶(fattyacidtranslocase，CD36)是促进骨骼肌细胞摄取脂肪酸的重要膜蛋白。进入细胞中的脂肪酸需进入线粒体

4、内进行代谢，肉碱脂酰转移酶(camitinepalmitoyltransferase1，CPTl)在脂肪酸由胞液向线粒体基质的转运中起关键作用。胰岛素抵抗及脂质沉积发病机理的关键因子之一是线粒体功能受损，而线粒体融合蛋白2(mitofusin2,MFN2)对线粒体功能有重要的影响。越来越多的研究表明MFN2表达与胰岛素抵抗状态相关，但具体机制仍不清楚。本研究通过高脂饮食构建大鼠胰岛素抵抗模型，用MFN2腺病毒进行干预，探讨MFN2是否可通过改善线粒体功能，增加CPTl的表达，从而减少骨骼肌脂质代谢中间产物的沉积，

5、进而改善胰岛素抵抗。目的：探讨MFN2对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠骨骼肌脂质沉积及脂肪酸代谢中CD36及CPTl的影响极其机制。方法：64只雄性SD大鼠随机分为2组，正常对照组(8M16只、高脂饮食组(8F)48只，正常对照组给予普通饲料喂养，高脂饮食组给予高脂饲料喂养8周，应用清醒状态下高胰岛素正葡萄糖钳夹试验判断高脂饮食诱导胰岛素抵抗模型成功，之后各组随机选取8只大鼠，腹主动脉取血处死动物，血糖(bloodglucose，BG)应用快速血糖仪测定；血甘油三酯(triglyceride，TG)、总胆固醇(to

6、talcholesterol，TC)应用全自动生化分析仪测定；ELISA试剂盒测定血清胰岛素(insulin，INS)，骨骼肌甘油二酯(diacylglycerols，DAG)、神经酰胺(ceramides，CEA)、长链脂酰辅酶A(10ngchainfattyacidCoAs，LCACoAs)的变化；GPO—PAP酶法测中文摘要定骨骼肌甘油三酯含量的变化；透射电镜观察大鼠骨骼肌线粒体形态变化；用RT-PCR和Westernblot的方法分析大鼠骨骼肌CD36及CPTl的mRNA和蛋白的表达。之后将剩余高脂饮食组

7、大鼠随机分为：高脂对照组(Contr01)、空病毒组(Ad)、MFN2低剂量组(Ad．MFN2108)、MFN2中剂量组(Ad．MFN2109)、MFN2高剂量组(Ad．MFN21010)各8只，分别应用PBS、MFN2空病毒或不同剂量MFN2腺病毒鼠尾静脉注射干预三周，高胰岛素正葡萄糖钳夹试验评估各组大鼠胰岛素抵抗程度，之后处死各组大鼠，BG应用快速血糖仪测定；TG、TC应用全自动生化分析仪测定；ELISA试剂盒测定INS，骨骼肌DAG、CEA、LCACoAs的变化；GPO．PAP酶法测定骨骼肌甘油三酯含量的变

8、化；电镜观察大鼠骨骼肌线粒体形态变化；RT-PCR和Westernblot的方法分析大鼠骨骼肌CD36及CPTl的mRNA和蛋白的表达。结果：1、高脂饮食喂养8周，指标变化：(1)胰岛素抵抗大鼠模型制作成功：高脂饮食喂养8周后，高脂组BG[(7．2+0．6vs5．7+0．7)mmol／L]及INS[(40．6+3．9vs28．7+3．3)mU／L]明显高于正常对照组，差异