墨旱莲提取物旱莲苷a抑制hepg-2细胞的活性研究

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文墨旱莲提取物旱莲苷A抑制HepG-2细胞的活性研究姓名：李胜友学号：2111540054院系：药学院学位类型：学术学位专业：微生物与生化药学研究方向：植物提取物抗肿瘤作用导师：黄宏靓论文提交日期：2018年3月论文答辩日期：2018年5月学位授予单位：广东药科大学二〇一八年五月广东药科大学硕士研究生学位论文ThestudyofinhibitoryeffectofecliptasaponinAonHepG-2CellsCandidate：LiShengyouStudentID：2111540054Affili

2、ation：SchoolofPharmacyAcademicDegreeApliedfor：AcademicdegreeSpeciality：MicrobiologyandBiochemicalPharmacySupervisor：AssociateProf.HuangHongliangDayofDefence：May2018Degree-Conferring-Institution：GuangdongPharmaceuticalUniversity广东药科大学硕士研究生学位论文墨旱莲提取物旱莲苷A抑制HepG-2细胞的活性研究摘要目的

3、：随着科技的不断发展，肿瘤治疗取得了巨大进步。化疗、放疗等传统的治疗方法虽然提高了治疗效果，同时也带来了很大的副作用，甚至部分肿瘤产生了耐药性。为了优化治疗肿瘤的方法和获得积极的治疗效果，在中药中探索发现新的抗肿瘤活性成分呢一直广受关注。其中中药墨旱莲具有多种药理活性，也具有一定的抗肿瘤活性，但其作用机制还不清除。旱莲苷A是其中主要的成分，提取及分离技术成熟，我们试图探索旱莲苷A抗肿瘤作用及其可能的作用机制。方法：本论文对旱莲苷A抗肿瘤活性、促细胞凋亡机制和促细胞自噬机制进行了研究。MTT实验检测旱莲苷A对肝癌细胞（HepG-2细胞）的

4、增殖抑制作用；通过多种染色实验验证药物能否诱导细胞凋亡及对凋亡细胞形态的影响；通过细胞划痕实验和transwell实验检测旱莲苷A抑制HepG-2细胞迁移和侵袭情况；MDC（丹酰戊二胺）染色检测旱莲苷A是否能够诱导细胞发生自噬；通过线粒体膜电位检测，活性氧检测及流式细胞术等实验检测细胞凋亡，单细胞凝胶电泳观察单个细胞DNA损伤程度；Westernblot免疫印迹法检测旱莲苷A作用于细胞后，细胞内凋亡和自噬相关蛋白的表达水平。I广东药科大学硕士研究生学位论文结果：MTT结果显示旱莲苷A处理细胞48h后，旱莲苷A明显抑制HepG-2细胞的生

5、长，且呈浓度依赖性趋势，其IC50为（29.8±1.6）μmol/L（与对照组比较P＜0.05）。通过AO/EB染色发现，浓度为12.5μmol/L、25μmol/L的药物组可看到凋亡细胞明显增加，表现出明显的凋亡学形态特征。流式细胞术表明HepG-2细胞在旱莲苷A作用48h后，发生了不同程度的凋亡，其细胞早期凋亡比例分别增加了4.06%和11.82%。浓度为12.5μmol/L、25μmol/L旱莲苷A作用48h后，可显著阻滞细胞周期，阻滞在S期的比例分别为24.03%、43.19%。彗星实验结果表明旱莲苷A能引起细胞DNA的损伤。细

6、胞划痕实验和transwell实验显示旱莲苷A可有效抑制肿瘤细胞迁移和侵袭。MDC染色结果表明，旱莲苷A作用HepG-2细胞48h后，能够明显的诱导细胞发生自噬。Westernblot结果显示，旱莲苷A作用HepG-2细胞48h后，细胞中Bcl-2和PARP等蛋白水平均有下调，且caspase-3和Bax等蛋白水平升高，表明旱莲苷A可能通过干扰线粒体信号通路诱导细胞凋亡。Westernblot结果显示，旱莲苷A能够下调p62和LC3Ⅰ/Ⅱ的比例，提高Beclin1的比例，表明旱莲苷A可引起HepG-2细胞自噬。结论：可以初步推测，一定浓

7、度的旱莲苷A作用于HepG-2细胞后，可以促进线粒体依赖凋亡通路的激活，发挥凋亡作用；也可能是通过增II广东药科大学硕士研究生学位论文加Beclin1，从而增加LC3Ⅰ/Ⅱ的比例，促进HepG-2细胞的自噬。关键词：旱莲苷A；细胞凋亡；细胞自噬；肿瘤III广东药科大学硕士研究生学位论文THESTUDYINHIBITORYEFFECTOFECLIPTASAPONINAONHEPG-2CELLSAbstractObjective：Withthedevelopmentofbioscience,thecognitionofthepathogen

8、esisoftumorisgraduallydeepened.Inordertoimprovetheefficiencyofcancertreatmentandexplorethebesttherapeut