黄芩苷抑制肝癌HepG-2细胞增殖实验探究.doc

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1、黄苓昔抑制肝癌HepG-2细胞增殖实验探究作者：张学武崔长旭陈丽艳全吉淑【摘要】目的观察黄苓昔对肝癌HepG-2细胞增殖的影响。方法采用MTT比色法观察黄苓昔抑制肝癌HepG-2细胞增殖；采用流式细胞仪检测黄苓昔对HepG-2细胞周期分布的影响。结果黄苓昔可抑制肝癌HepG-2细胞增殖，其作用具有时间和浓度依赖性；黄苓昔可诱导细胞凋亡，同时改变细胞周期分布，多数细胞阻滞于S期，与对照组比较，细胞凋亡率差异有显著性。结论黄苓昔可诱导肝癌HepG-2细胞凋亡，改变细胞周期分布，从而抑制细胞增殖。【关键词】黄苓昔细胞周期细胞凋亡Abstract：ObjectiveToinvest

2、igatetheinhibitionofbaicalinonproliferationhepatomaHepG~2cells・MethodsMTTassaywasusedtoexaminetheeffectofbaicalinontheproliferationofHepG~2cellandf1owcytometrywasusedforthecellcycledistribution.ResultsBaicalininhibitedtheproliferationofHepG-2cellandtheeffectswereinatime-and-concentrationde

3、pendentmanner・Baicalincouldalsoinduceapoptosis,theSphasewasarrestedandtheratioofapoptosistherewassignificantdifferencethanthatofcontrolgroup,respectively.ConclusionBaicalininhibitsproliferationofHepG~2cellsviainductionofapoptosisandcellcyclearrest.Keywords：Baicalin；Cellcycle；Apoptosis黄苓为唇形

4、科(Labiatae)植物黄苓ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥根，是常用中药。性寒、味苦，归肺、心、肝、胆、大肠经，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效。黄苓的主要成分是黄酮和黄酮醇、二氢黄酮和二氢黄酮醇、苯乙醇糖昔、挥发油以及葡萄糖、蔗糖、苯甲酸、B-谷笛醇、豆笛醇、菜油笛醇和苯甲醇等。其中，属于黄酮类化合物的黄苓＜(Baicalin)作为黄苓的最主要有效成分，在黄苓根中含量为9%~14%。近年来，随着对黄苓昔的深入研究，发现黄苓昔具有抗菌、抗病毒、抗感染、抗HIV、抗氧化及清除氧自由基和治疗心血管疾病等作用。本实验选用肝癌HepG-2细

5、胞株作为研究对象，研究黄苓昔对肝癌HepG-2细胞增殖的作用以及黄苓昔对细胞周期分布和凋亡的影响。1材料与仪器1.1细胞株HepG-2细胞购于南京凯基生物技术公司。1.2药物试剂黄苓昔购于南京青泽医药有限公司。嗟哩兰购自美国Sigma公司；RPMI1640培养基购自美国GIBCO公司；小牛血清购自北京华美生物工程公司；胰蛋白酶购自美国DIFCO公司；鼠抗bcl-2、p53单克隆抗体购自福州迈新生物有限公司。1.3仪器OLYMPUS倒置显微镜购自日本；RT-2100型酶标仪购自美国；FACSCalibur流式细胞仪购自美国；JEM-1200EX透射电子显微镜购自日本；PD-2

6、000真彩色病理细胞图像分析仪购自北京天地百年科技公司。2方法2.1HepG-2细胞培养肝癌HepG-2细胞贴壁生长，培养于含10%灭活小牛血清，含100U/ml青霉素及100U/ml链霉素的RPMI1640培养液中,置37°C、相对湿度90%、5%C02孵箱内培养。2.2HepG-2细胞形态的变化取对数生长期HepG-2细胞按每瓶1X105个细胞接种于96孔细胞培养板中，24h后换液，加入含不同浓度(25,50,100ug/ml)黄苓昔的10%新生小牛血清RPMI1640培养液200ul,另设终浓度为25Ug/ml5-Fu的阳性对照组和不加药物的阴性对照组。置5%C02孵

7、箱内培养24,48,72h。每天在倒置显微镜下观察细胞生长状态，48h时进行常规HE染色。1.3MTT比色实验取对数生长期的HepG-2细胞按每孔1X105个细胞接种于96孔板中，每孔体积200Hl。24h后换液，黄苓昔组加入黄苓昔使其终浓度分别为25,50,100Ug/ml,另设终浓度为25ug/ml的5-Fu阳性对照组和不加药物的阴性对照组以及不接种细胞的空白对照组。分别培养24,48,72h,每个浓度每个时点均设4个复孔。于终止前4h，每孔加入5mg/mlMTT溶液20ul,继续孵育4h后弃去上清液，加入15