卵黄免疫球蛋白IgY改善实验动物牙周炎和口臭的研究

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1、学校代码：10264研究生学号：D150202023上海海洋大学博士学位论文卵黄免疫球蛋白IgY改善实验动物牙周炎和题目：口臭的研究Studyontheimprovementofperiodontitis英文题目：andhalitosisinexperimentalanimalsbyeggyolkimmunoglobulin(IgY)专业：食品科学与工程研究方向：应用免疫学姓名：王芳指导教师：吴文惠二O一八年五月二十日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的

2、学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数

3、据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学博士学位论文上海海洋大学博/硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注焦炳华海军军医大学教授主席杨焱上海市农科院教授委员陈舜顺上海海洋大学教授委员马明上海海洋大学教授委员包斌上海海洋大学副教授委员郭锐华上海海洋大学讲师秘书答辩地点图文中心406答辩日期2018.05.20上海海洋大学博士学位论文卵黄免疫

4、球蛋白IgY改善实验动物牙周炎和口臭的研究摘要IgY（ImmunoglobulinofYolk,IgY）是卵生动物主要免疫球蛋白，功能上等同于哺乳动物进化上的高级IgG，卵生动物IgY通过卵黄传输至胚胎，成为保护胚胎不受外界病原菌侵袭的抗体。鸡抗体IgY的收集和分离快速而经济，母鸡经特定微生物免疫后，从免疫母鸡的蛋黄中能获得效价高而持久的IgY抗体，被应用于抗菌、抗病毒、抗肿瘤和免疫检验。基于免疫球蛋白IgY的体内外功效作用，发现特异性IgY改善口腔厌氧致病菌（Porphyromonasgingiv

5、alis,Prevotellaintermedius和Fusobacteriumnucleatum）感染的大鼠牙周炎和口臭的典型症状，阐明IgY治疗口腔疾病的作用。1.免疫球蛋白IgY的制备和生物化学特性。P.gingivalis,P.intermedius和F.nucleatum菌液加入甲醛和弗氏佐剂，制成灭活疫苗，分3次免疫优质来杭蛋鸡（Leghorn），收集鸡蛋，分离蛋黄，采用0.01mol/LpH5.0的醋酸缓冲液充分搅拌，4℃冷藏沉降脂质物质，离心后收集上清液，采用100kDa孔径透析进行

6、浓缩，获得IgY，经真空冷冻干燥和ELISA效价检测，其含量为360mmol/L，对P.gingivalis,P.intermedius和F.nucleatum的效价分别为1:25600、1:12800和1:25600。SDS-PAGE显示IgY的分子量180kDa，由两条重链（67-70kDa）和两条轻链（25kDa）组成。2.免疫球蛋白IgY作用实验动物的免疫特性。以IgY作为体外入侵抗原，检++测Wistar大鼠血液中CD4和CD8的数量和比值，免疫调节因子组胺、IgM、IgE和IgG等的变化

7、，分析IgY可能引起的Wistar大鼠的免疫应答，新西兰兔的皮肤刺激和豚鼠的皮肤变态反应，评价样品的急性、多次皮肤刺激和皮肤变态反应强度，评价IgY对实验动物的免疫作用特性。结果显示，实验组和对照组的大鼠体重和进食量均无显著变化，组胺和IgM在第9天显著升高后恢复正常水平，IgG++和IgE基本无变化，CD4和CD8细胞数量分别为1902.60和974.00、免疫细胞中++占比为54.36%和27.83%，CD4/CD8比值为1.95，都显著低于阳性对照（p<0.05），且在正常范围内。皮肤刺激试验

8、急性1-72h、慢性1-14d均无刺激，皮肤变态试验激发后24h和48h有2例积分>2的动物，属于微弱变态反应。免疫应答、皮肤刺激和皮肤变态试验结果表明IgY不会引起大鼠的免疫应答，对新西兰兔皮肤无I上海海洋大学博士学位论文刺激性，对豚鼠皮肤有微弱的变态反应，当IgY的含量降低时其皮肤变态反应将得到有效控制，表明IgY作为外来抗原对机体无致敏性。3.免疫球蛋白IgY治疗大鼠牙周炎的功效。用口腔厌氧致病菌P.gingivalis,P.intermedius和F.nucl