试析肿瘤抗原肽和鸡卵黄免疫球蛋白的igy的分离和分析研究

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1、天津大学硕士学位论文肿瘤抗原肽和鸡卵黄免疫球蛋白的IgY的分离和分析研究姓名：陈代梅申请学位级别：硕士专业：化学工程指导教师：孙淑清20040101中文摘要肿瘤抗原可以诱导机体的免疫应答，是肿瘤的免疫治疗中多肽疫苗的分子基础。随着对肿瘤抗原的新认识，肿瘤疫苗的研究至今已有许多重大发展。近十年来发展起来的肿瘤抗原肽筛选方法，为临床肿瘤免疫治疗提供了大量备选抗原分子。本文总结了肿瘤抗原的种类和目前寻找肿瘤抗原方法，并简单介绍了高效液相色谱／质谱联仪器结构特点和液质联用技术寻找抗原肽方面的应用。实验采用细胞膜酸洗技术洗脱细胞表面的抗原多肽，

2、除盐浓缩后用高效液相色谱／质谱联用技术对洗脱物进行分离分析，根据质谱中氨基酸残基的组成和精确的质曩数，推算出了质谱图中抗原多肽质量数所对应的氨基酸组成。实验对酸洗液的酸度和洗脱时间及其后处理(分别用C18柱和纳滤脱盐)进行了探讨，最后还摸索了二次液相分离抗原多肽的规律性。用水稀释脱脂．两步盐析一凝胶过滤法从免疫鸡卵黄中分离纯化IgY，经SDS-PAGE电泳分析IgY的纯度。实验对电泳的各种条件进行了摸索，找到了最佳的电泳条件。通过电泳图可以看出IgY的纯度达到98％。说明此分离纯化IgY的方法是简单有效的。关键词：肿瘤抗原肿瘤免疫肿瘤

3、肽疫菌高效液相色谱和质谱联用电泳鸡卵黄免疫球蛋白AbstractImmunesystemrecognizedtumorantigensarethen101ecuk瞳basisforcancerimmunotheraphy．Alongwiththenewunderstandingoftumorantigen,thedeveiopmentoftumorvaccinehasgotintoanewstage．Theindentificationmethodsoftumorantigenshavebeendevelopedinlastdecad

4、e，providingalargernumberofcandidateantigensforclinicaltrials．Inthisthesis，theclassificationoftumorantigensandtheidentWlcationmethodsoftumorantigensWeredepicted．meanwhile，thestructureofLC-ESI-MS／MSwasintroducedandtheindentificationmethodoftumoeantigensbyLC-ESI·MS／MSWasdi

5、scussed．Theexperimentempbyedmildacidelutiontoeliminatetumorantigensfromculturecelllines．Got瑚ofsaltandcondensed·TheextrationwassequencedandindentifiedbyLC—ESI-MS／MS，andthentheaminophenolconstitutesoftBnlorantigensWCrereckoned，whichcorrespondstothemassnumbershowedbymasssp

6、e加】r]也Ontheotherhand，thepHofacidelutionandthetimeofacidwashWaSstudiedandtheeffectofgettingridofsaltb@twce,nnanofiltratinandC18Wascompared．Meanwhile，theregulationofdouble∞parationbyHPLCWBSdiscussed．ImmunoglobulinY(Ig的wasisolatedandpurifiedfromyolkoftheeggsusingatwo—steps

7、altprecipitationandone-stepgelfiltrationprotocal，andthepurificationofIgYwasanalysedbySDS-PAGE．Duringtheexperiment，thevarietyofelectrophonesisWasstudied，thenthebestcondRionwasselected．ThefigureofelectrophonesisshowedthepurificationoflgYcanreach98％．ItWasconcludedthattheme

8、thodofpurificationandimlationiseffectiveandsimple．Keyword：tumorantigenRlmorimmunizationtumorvaccineLC-EMS-MS黼S