粗疣合叶苔内生真菌及其活性代谢产物的研究

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1、粗疣合叶苔内生真菌及其活性代谢产物的研究摘要内生真菌是指那些在其生活史中的某一段时期内生活在植物组织内，对植物组织没有引起明显病害的真菌。近年来的研究表明，内生真菌能够产生许多结构新颖、生理活性独特的或与宿主植物相同和相似的天然生理活性物质。基于此，本课题选择生境独特的租疣合叶苔ScapaniaverrucosaHeeg．为实验材料，开展内生真菌分离、鉴定及其代谢产物的生物活性研究，并对活性菌株进行化学成分分离和鉴定。主要结果如下：1．通过组织分离法，采用PDA、KN、PY、察氏和萨氏5种分离培养基，从粗疣合叶苔中共分离纯化得到49株内生

2、真菌。2．以经典形态学分类方法，对其中10株产孢的内生真菌进行显微形态特征的观察和鉴定，分别属于青霉属PeniciHium和毛壳菌属Chaetomium，其余39株内生真菌在本试验条件下不产生孢子，占总分离菌株数的79．6％，对这些无孢类群进行ITS序列测序，并与序列相似性较高的已知菌株进行比较分析，确定了它们的分类地位。分离得到的粗疣合叶苔49株内生真菌分属于2个纲(Sordariomycetes，Eurotiomycetes)、4个目(Hypocreales，Eurotiales，Sordiriales，Xylariales)、5个科

3、(Hypoereaceae，Trichocomaceae，Clavicipitaceae，Chaetomiaceae，Xylariaceae)、7个属(Hypocreasp．，Penicilliumsp．，Tolypocladiumsp．，Chaetomiumsp．，Xylariasp．，Nemaniasp．，Creosphaeriasp．)，其中16株鉴定到种的水平，25株鉴定到属的水平，8株放在科的水平。毛壳属Chaetomium和Creosphaeria属为优势种群，均占总菌株数的18．36％。3．就分离到的内生真菌进行发酵培养，对

4、其代谢产物进行生物活性筛选。稻瘟霉模型活性初筛的结果显示，粗疣合叶苔分离得到的49株内生真菌中，能抑制稻瘟霉孢子萌发的菌株数为40株，占总分离菌株数的81．6％。进一步的抗真菌及体外抗肿瘤活性测试发现，粗疣合叶苔内生真菌的代谢物具有良好的抗菌及体外抗肿瘤效果，8株内生菌对新生隐球菌和红色毛癣菌均有明显的抑菌活性，菌株T1l、T35对白色念珠菌、新型隐球菌、红色毛癣菌和烟曲霉均具有很好的抑制作用。此外，8株内生菌的代谢产物对肿瘤细胞均有不同程度的细胞毒活性，尤其对HL．60都有较好的细胞毒作用。因此，粗疣合叶苔内生真菌能产生抗真菌和细胞毒活

5、性物质，是开发抗菌抗肿瘤等药物的潜在资源。4．运用GC．MS鉴定了内生真菌T37低极性部分的28种化学成分，同时鉴定了粗疣合叶苔挥发油中的49种化学成分。宿主含有大量的倍半萜，而T37主要为烷类，酮类，酚类和酯类化合物，二者的化学成分在数量和种类上存在较大的差异。内生菌T37产生了与寄主植物成分不同的次生代谢产物，并且这些物质也同宿主一样表现出一定的抗真菌谱和细胞毒活性。第二军医大学硕士学位论文5．在活性追踪指导下，对菌株T37、T3l、T35的乙酸乙酯提取物进行分离和结构解析。采用常压柱层析和薄层层析等技术，共分离得到15个单体化合物，

6、通过对化合物质谱、红外光谱、紫外光谱、核磁共振谱等波谱鉴定，并与标准品、文献值以及图谱库对照，确定了其中10个化合物的结构，分别为麦角甾醇、过氧麦角甾醇、甘露醇、2，3．二甲氧基．5．甲基苯酚、methylcurvulinate、curvulin、O．methylcurvulinicacid，柄曲霉素、ChaetofusinsA和ChaetofusinsB。其中，4个化合物为首次分到，化合物ChaetofusinsA和Chaetofusins为两个结构特殊的新的生物碱类化合物，其余5个化合物结构需经进一步鉴定。粗疣合叶苔内生真菌具有良好的

7、抗真菌和细胞毒作用，同时也蕴藏着较丰富的结构新颖的活性物质，是潜在的天然药物新资源。关键词：粗疣合叶苔；内生真菌；鉴定；抗真菌；抗肿瘤；GC／MS；次生代谢产物粗疣合叶苔内生真菌及其活性代谢产物的研究AbstractEndophytesarereferredtofungicolonizinginhealthyplanttissueswithoutcausingovensymptoinsinorapparentinjurytothehost．Researchresultsinrecentyearsshowthatendophytescanp

8、roducesomemetabolitessameorsimilartothosefromthehostplant，andmetaboliteswiththenovelstructureand