棉花抗黄萎病相关基因ghskip35基因的克隆与功能验证

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1、密级：论文编号:中囯农他科学院学位论文棉花抗黄萎病相关基因基因的克隆与功能验证CloningandFunctionalAnalysisofG/tSKIP35geneResponsibleforResistancetoVerticilliumwiltinGossypiumhirsutumL.硕士研究生：刘凯指导教师：简桂良研究员申请学位类别：农业推广硕士专业：植物保护培养单位：植物保护研究所研究生院提交日期2015年4月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的

2、研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构时学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研宄生签名:时间：十年#月>曰关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：令时间：<月>曰导师签名:时间：年<月爻日中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目

3、棉花G//570P35基因的克隆与功能验证论文作者刘凯专业植物保护研宄方向分子植物病理学培养单位（研宄所、中指导教师简桂良植物保护研究所心）姓名职称单位专业签名中国农业科学院棉朱荷琴研究员植物病理学评花研究所中国农业大学农学阅吴学宏副教授植物病理学与生物技术学院人答中国科学院微生物生物化学与分子生物夏桂先研究员中研究所学I中国农业大学农学简恒教授植物病理学与生物技术学院中国农业科学院植彭德良研究员植物病理学物保护研宄所答中国农业大学农学13植物病理学~J-

4、文答辩时间地点2015年5月27日植保所第一会议室密级:论文编号:中国农业科学院学位论文棉花抗黄萎病相关基因GhSKIP35基因的克隆与功能验证CloningandFunctionalAnalysisofGhSKIP35geneResponsibleforResistancetoVerticilliumwiltinGossypiumhirsutumL．硕士研究生：刘凯指导教师：简桂良研究员申请学位类别：农业推广硕士专业：植物保护培养单位：植物保护研究所研究生院提交日期2015年4月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDis

5、sertationCloningandFunctionalAnalysisofGhSKIP35geneResponsibleforResistancetoVerticilliumwiltinGossypiumhirsutumL．M.S.Candidate：LiuKaiSupervisor：JianGui-liangDegree：MasterofAgriculturalExtensionSpecialty:PlantProtectionApril2015摘要棉花是在国民经济中占重要地位的经济作物，黄萎病现已成为影响生产的严重因素之一。防治黄萎病根本方法是培育和应用抗病品种。因此，了

6、解棉花抗黄萎病的信号途径，分离抗病相关基因，已成为棉花分子生物学研究的重点内容之一。国内外学者研究表明，SCF信号复合体作为泛素途径一类重要的E3连接酶，在介导R基因的抗性、茉莉酸反应、乙烯反应等植物抗病反应中起着重要作用。研究以本课题组构建的中植棉KV1SSH文库为基础，克隆了棉花泛素途径SCF信号复合体中的GhSKIP35(Skp1-interactingpartner35)基因，并对其功能进行了较为详细的研究，取得的主要结果如下：1.通过基因电子克隆、5ʹRACE、3ʹRACE成功克隆出GhSKIP35基因全长。GhSKIP35基因开放阅读框（ORF）为1863bp，编码6

7、20个氨基酸；通过与拟南芥、鹰嘴豆、甜橙、番茄、土豆、葡萄等10种植物SKIP35基因编码的氨基酸序列比对有76.63%的总体同源性，并且，都有相同的保守区域。通过系统进化树分析，显示GhSKIP35与甜橙的SKIP35蛋白的关系最近，同源性最高。通过对GhSKIP35蛋白氨基酸保守区域分析，发现其含有1个长达100多个氨基酸的锚蛋白重复序列。2.实时荧光定量PCR分析显示，在接种大丽轮枝菌V991菌系后初期棉花根部GhSKIP35基因表达量激增，12h便可达到顶峰，24～48h