津力达颗粒对高脂诱导的hepg2细胞胰岛素抵抗影响的研究

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1、授予单位代码10089学号或申请号20122521H处(E搿七迳HebeiMedicalUniversity硕士学位论文科学学位津力达颗粒对高脂诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗影响的研究研究生：段力园导师：宋光耀教授王超副研究员专业：内科学二级学院：河北省人民医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论女研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有《河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文,第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原

2、始数据、申报的专利等知识产权均归g北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。/’设人夕i:“f..-•：研究生签名^导师签章j组学院领导盖章：、：於‘/年；月《曰河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。目录中文摘要………………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………………4英文缩写…………………………………………………………

3、……………8研究论文津力达颗粒对高脂诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗影响的研究前言………………………………………………………………………9材料与方法……………………………………………………………9结果……………………………………………………………………25附图……………………………………………………………………27附表……………………………………………………………………33讨论……………………………………………………………………37结论……………………………………………………………………42参考文献………………………………………………………………43综述二酰甘油

4、与人类骨骼肌组织胰岛素抵抗关系的研究进展………46致谢…………………………………………………………………………53个人简历……………………………………………………………………55中文摘要津力达颗粒对高脂诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗影响的研究摘要胰岛素抵抗（IR）是2型糖尿病及多种代谢性疾病的共同病理生理基础。而氧化应激是引起IR的关键性因素。既往有研究表明，复方制剂津力达（由人参、黄精、苍术、苦参等17味中药组成）可有效降血糖，改善2型糖尿病患者的症状，并具有保护胰岛β细胞、增加胰岛素分泌、改善IR的作用。但其具体机制尚不明确，本研究拟通过观察津力达在体外细

5、胞水平对高脂诱导的HepG2细胞IR的影响，探讨其改善IR的机制，为临床用药提供理论依据。目的：观察中药复方制剂津力达对高脂诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗以及氧化应激的影响，探讨津力达改善胰岛素抵抗的机制。方法：采用高脂（含0.25mmol/L棕榈酸培养基）干预法建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型。HepG2细胞随机分为2组，正常对照组和高脂培养基组，分别干预24小时后采用葡萄糖氧化酶法测定培养基中葡萄糖浓度，计算葡萄糖摄取率，判断造模成功。造模成功后将高脂培养基组随机分为5组，即高脂对照组（PA）、二甲双胍培养基组（Met）（二甲双胍浓度为0.2mg/mL）、

6、津力达低剂量组（JLD-L）（津力达浓度为0.75mg/mL）、津力达中剂量组（JLD-M）（津力达浓度为1.5mg/mL）和津力达高剂量组（JLD-H）（津力达浓度为3.0mg/mL），同时设立正常培养基对照组（Con），二甲双胍为阳性药物对照。分别干预48小时后收集细胞，采用相应试剂盒测定各组HepG2细胞氧化应激相关指标，即还原型谷胱甘肽（GSH）、脂质过氧化物（LPO）的含量，过氧化氢酶（CAT）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性；DHE荧光染色检测HepG2细胞活性氧簇（ROS）的含量；Real-TimePCR

7、检测HepG2细胞胰岛素信号通路上胰岛素受体（INSR）、胰岛素受体底物-1（IRS-1）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶β（AKT）和葡萄糖转运蛋白2（GLUT2）的mRNA表达水平；WesternBlot检测HepG2细胞PI3K总蛋白表达水平，以及IRS-1、AKT、c-jun氨基末端激酶（JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）的总蛋白及磷酸化蛋白水平。1中文摘要结果：1HepG2细胞的胰岛素抵抗体外模型建立HepG2细胞培养24小时后PA组培养基中葡萄糖含量较Con组高，差异有统计学意义（P<0.05），胰岛素敏感性下降，表明用软

8、脂酸诱导胰岛素抵抗体外细胞模型成功建立