肝细胞移植对裸鼠肝铜代谢的影响

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1、中图分类号：R3&R605;R726肝细胞移植对裸鼠肝铜代谢的影响院（系）、所临床屄学脘研究生姓名n骁学科、专业外科学导师姓名…彭强二〇—五年五月四川医科大学毕业硕士研究生学位论文独创性声明及发表承诺书本人声明所呈交的学位论文（已整理成发表形式）是我个人在四川医科大学导师指导下，由泞师及四川医科大学提供一切科研条件的情况下进行的研究丁作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，+包含其他人或其它机构己经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的说

2、明并表示了谢意。在即将毕业离校之际，本人郑重承诺：该论文将以四川医科大学的名义发表（论文作者为研究生及导师，作者所在单位为四川医科大学），并在发表后立即将发表论文原件（期刊）寄与导师1册。学位论文作者签名■M曰期：广月/?□四川医科大学硕士学位论文版权使用授权书本人完全了解四川医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：四川医科大学有权保留并向有关部门或机构送交本人学位论文的复印件和电子版，允许论文被杳阅和借阅，允许有关部门或机构以电了•出版物形式出版发行，并对外进行全文内容服务。本人授权四川医科大

3、学可以将本人学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，进行数字化处理汇编、通过N络或其它途径进行交流传播.可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印、扫描或其他复制手段保存和汇编学位论文，即四川医科大学具有本人学位论文的数f•化制品复制权、信息网络传播权和汇编权。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过N络向社会公众提供信息服务。保密□，在.年解密后适用本授权书本人提交的学位论文属不保密D(请在以上方框内打“V”)学位论文作者签名:献u期.

4、•厂年r月f阳円期：年r月^曰目录1肝细胞移植对裸鼠肝铜代谢异常的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11.1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11.2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51.3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81.4材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91.5结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯201.6讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯311.7结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯351.

5、8参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯361.9英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯392致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯403肝豆状核变性疾病与肝细胞移植治疗（综述）⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41肝细胞移植对裸鼠肝铜代谢的影响摘要目的：1.通过铜负荷饮食法建立裸鼠的肝脏铜代谢异常疾病模型，分离同种裸鼠肝细胞悬液，予以腹腔内移植，研究肝细胞移植对裸鼠铜代谢的影响；2．通过检测脂质过氧化物质细胞色素P450（cytochromepro

6、teinP450，CYP450）、肝丙二醛（MDA）、裸鼠肝组织氧活性簇(ROS)及超氧化物歧化酶（SOD）的变化，探讨移植肝细胞影响裸鼠肝铜代谢的可能机制。方法：1.裸鼠肝脏铜代谢异常疾病模型的建立：裸鼠（4周龄,体重23±2.3g），于SPF级无菌动物饲养房正常饲养10天适应环境后,采用铜饮食负荷法造模，喂饲混有硫酸铜1.0g/kg的饲料和0.185%的硫酸铜水4周。通过代谢笼收集裸鼠24小时尿液测定尿铜值，抽血做肝功能检测来评价模型的建立。2．实验分组：将40只裸鼠肝铜代谢异常模型随机分为2

7、组，肝细胞移植组（组1）及腹腔肝细胞培养液注射组（组2），每组各20只。取20只未造模裸鼠（同龄正常饮食饮水裸鼠）行肝细胞移植做正常代谢对照组（组3）。另取40只同龄裸鼠作1对1肝细胞移植的供体。3．裸鼠移植肝细胞悬液制备及实验干预。4.实验检测：分别在细胞移植前1h，移植后3d，7d，14d，28d对三组裸鼠心脏穿刺抽血0.1ml行肝功（ALT、ALB、AST）检测、血清铜(serumcopper)含量测定、血清铜蓝蛋白（ceruloplasmin，CP）测定。在术后7天、28天分别对3组裸鼠行

8、活检取部分肝组织，所取肝组织制成细胞匀浆检测肝脏铜含量，ELISA测细胞色素P4502E1蛋白-1-表达变化，肝组织匀浆的SOD活性,肝组织MDA含量，肝组织活性氧簇(ROS)浓度变化。移植后28天时行肝组织和移植细胞活检，肝组织以10%的福尔马林溶液固定，石蜡包埋切片，采用HE染色后，于光学显微镜下行病理学检测及肝铜染色。5.统计学分析计量资料使用均数±标准差描述，计数资料采用率和构成比描述；两组间的比较采用t分析；检验水准（а）设定为0.05，P＜0.05为差异具有统计学意义。