草莓镶脉病毒p6基因致病机制研究

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1、〇、分类号：；Ｕ午单位代码＿巧级：学号：。。！叩皆容敗怎必九琴学位论文草窜镇脉病巧Ａ５基因致病化制研究ＦｕｎｃｔｉｏｎａｎａｌｓｉｓｏｆａｔｈｏｅｎｉｃｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＰ６ｅｎｅｏｆｙｐｇｇＳ化ａｗｂｅｎｙｖｅｉｎｂａｎｄｉｎｇｖｉｒｕｓ研究生：陈静ｊ指导教师；江丹多申请学位口类级别：农学硕±专业名称：植物病理学研巧方向；分子植物柄韓所在学院；植物保护学院答辩委员会主席二零

2、一五年六月ＡＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒ化ｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔ：ｅｒＦｕｎｃ村ｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐａ化ｏｇｅｎｉｃｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｇｅｎｅｏｆＳ化ａｗｈｅｒｔｙｖｅｉｎｂａｎｄｉｎｖｉｍｓｇＢｙＣｈｅｎＪｉｎｇＳｕｐｅｒｖｉｓｅｄｂｙＡｓｓｏｃｉａｔｅＰｒｏｆ．ＪｉａｎＴｏｎｇｇＡｎｈｕｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＨｅｆｅｉ２３００％，Ｐ．Ｒ．ＣｈｉｎａＪｕｎｅ２０１５，独创

3、性声明本人声明所呈的学位论文是本人在导师指导下进行的研巧工作及取得的研巧成果。据我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方，外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研巧成果也不包含为获得安徽农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名；化每＾／。签字日期；年占月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部

4、口或机构送交论文的复印件和电子文件，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽农业大学可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，收录到《中国学位论文全文数据库》，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（，向化会公众提供信息服务保密的学位论文在解密后适用本授权书）。学位论文作者签名；你苗指导教师签名：＾６口！签字日期：７咬年月（日签字日期；壬起巧＿＾学位论文作者毕业后去向；工作单位；：电话；通信地址：邮编中文摘要寄主植物感染病毒，

5、会呈现发病症状，这些症状表型多与病毒的致病因子密切相关。病毒编码的致病蛋白又往往与寄主植物体内的相关蛋白因子相互作用，ｗＡｅ；从而调控寄主植物的新陈代谢和生长发育。研究证明，草璋镶脉病毒（况ｍ巧一ｖｅ切如ｍ泌ｎｖＺｍｙＳＶＢＶ）编码的Ｐ６蛋白是个症状决定子，在病毒侵染草萄ｇ，的过程中起关键作用，但目前尚不明确其具体分子致病机制。本裸题开展了Ｐ６（－）蛋白的相关致病功能研究，并且利用转录组测序技术ＲＮＡＳ巧全面了解病毒一侵染草菩后各基因的表达差异，进步验证差异基因的功能，为在分子水平

6、上阐述ＳＶＢＶ的致病机制奠定了基础。１．巧时浸润验证ＳＶＢＶＰ６及其突变体对症状表型的影响ＧＲ－Ｐ６－－６含Ｐ，ＰＧＲＡＰ６和空载体ＰＧＲ１０６的农杆菌分别浸润本氏化ＰＧＲＰ－ＡＰ６和ｐＧ民浸润的表型相似，系统叶均表现重度花叶症状，而空载体ＰＧＲ１０６浸润，仅表现轻花叶症状。ＥＬＩＳＡ检测Ｐ６和ＡＰ６是否在本氏烟中表达，结果表一－－，ＧＲＰ６能表Ｐ６蛋白Ｒ明Ｐ达，而ＰＧＡＰ６不能表达Ｐ６蛋白。为了进步确定－－－ＡＰ６蛋白的表达－Ｉ情况，构建重组表达载体ＰＧＲＰ６ＧＦＰ和ＰＧＲＡＰ

7、６ＧＴ，瞬时Ｒ－Ｐ－浸润本氏烟，结果发现，ＰＧ６ＧＦＰ浸涧的本氏烟叶片出现绿色焚光，而－ＧＲ－ＡＰ６ＧＦＰ浸润的本氏烟叶片无绿色灾光出现Ｐ，说明Ｐ６能够正常翻译下游ＧＦＰ，Ｓ，而ＡＰ６不能正常翻译。结果表明ＶＢＶＰ６可能在ＲＮＡ水平上影响植株的症状表型。２．ＳＶＢＶＰ６对ＰＶＸ的复制及对ＧＦＰ表达的影响－ＧＲ－Ｐ６、ＧＲＡＰ６和空载体ＧＲｅｒｎｂｌｏＰＰｐ１０６分别浸润本氏烟叶片，Ｎｏｒｔｈｔ和ｑＲＴ－ＰＣＲ检测系统叶中ＰＶＸ。－６、ＲＮＡ的积累水平结果发现，接种ｐＧ

8、ＲＰ－ＧＲＰＧＲＡＰ６和ｐ１０６的本氏烟系统叶中，ＰＶＸＲＮＡ的积累水平差异不思著，说－－明Ｐ６和ＡＰ６对ＰＶＸ的复制水平均没有影响、、－ＡＰ６。ＰＢＩＮＰ１９ＰＣＡＭＰ６ＰＣＡＭ－和空载体ＰＣＡＭ２３００分别与ｐＣＡＭＧＦＰ共浸润本氏烟叶片，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｗｅｓ化ｅｍｂｌｏｔ分别检测ＧＦＰ在ＲＮＡ水平和蛋白水平上的表达量。结果发现，－－－ＣＡＭＰ６和ＣＡＭＧＦＰ共