草莓镶脉病毒抑制沉默机制及其中国分离物侵染性鉴定

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1、：１０３６４分类号：单位代码；１２７２００４２密级：学号学位论文草葛镶脉病毒抑制沉默机制及其中国分离物侵染性鉴定ＳｉｌｅｎｃｉｎｍｅｃｈａｎｉｓｍａｎｄｉｎｆｅｃｔｉｎｇｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａｇｉｓｏｌａｔｅｏｆＳｔｒａｗｂｅｒｒｖｅｉｎｂａｎｄｉｎｇｖｉｒｕｓｙ研巧生：张汉平指导教师；江形副教授申请学位口类级别；农学硕±植物病理学专业名称：研巧方向：分子植物病毒所在学院；棺物保护举院答辩蚕员会主席二零一五年六月独创性声明本人声明所呈交的论文

2、是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的硏究成果。尽我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安微农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名；谦义平盗丰曰期：么０冷年６月曰＾关于论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文件全，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽农业大学可将学位论文的数部据或

3、部分内容编入有关数据库进行检索，收录到《中国学位论文全文库》，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）。签学位论文作者签名；谦钟指导教师签名；？字日期；化年《月？日签字日期：日工学位论文作者毕业后去向：通作单位：电话：信地址：邮编：ADissertationfortheDegreeofMasterSilencingmechanismandinfectingidentificationofChinaisolateofStrawberryveinbandingvirusBy

4、ZhangHanpingSupervisedbyAssociateProf.JiangTongAnhuiAgriculturalUniversityHefei230036,P.R.ChinaJune,2015中文摘要草莓镶脉病毒（Strawberryveinbandingvirus，SVBV）ORFVI编码的P6蛋白已证明是一个RNA沉默抑制子，能够抑制ssGFP诱导的16c本氏烟（Nicotianabenthamiana16cline）局部沉默，但其抑制沉默的机制尚不明确。本课题研究P6抑制沉默的机制，明确P6不能抑制dsGFP诱导的基因沉默，亦不能局部回复已沉默16c本氏烟的GFP基因

5、。本研究还克隆了SVBV沈阳分离物（SVBV-SY）和SVBV北京分离物（SVBV-BJ）的全长基因组；构建了SVBV-SY和SVBV美国分离物（SVBV-US）的侵染性克隆，明确了2分离物侵染森林草莓（Fragariavesca）引起的表型差异；构建了P6基因移码突变的SVBV-US侵染性克隆，证明P6是SVBV侵染森林草莓的必要基因；并构建了SVBV病毒载体，能够侵染森林草莓，为研究SVBV病毒基因和草莓基因的功能提供了研究工具。1.SVBVP6不能抑制dsGFP介导的RNA沉默含重组质粒pCAM-P6、pCAM-GFP和pCAM-dsGFP的农杆菌混匀共浸润本氏烟，3天后在UV光下观

6、察发现，叶片浸润部位无明显的绿色荧光，表明P6不能抑制dsGFP介导的RNA沉默。2.SVBVP6不能局部回复已沉默的16c本氏烟含重组质粒pCAM-GFP的农杆菌浸润16c本氏烟，30天后观察发现，植株绿色荧光消失，呈均匀的红色，GFP基因完全沉默。含重组质粒pCAM-P6的农杆菌单独浸润上述已沉默的16c本氏烟，3d后在UV光下观察发现，叶片浸润部位无明显绿色荧光。含重组质粒pCAM-P6的农杆菌与含重组质粒pCAM-GFP的农杆菌共浸润已沉默的16c本氏烟，3d后在UV光下观察发现，叶片浸润部位亦不出现明显的绿色荧光。说明SVBVP6蛋白不能局部回复已沉默的16c本氏烟。3.SVBV

7、沈阳分离物和SVBV北京分离物全长基因组的克隆采集感染SVBV的草莓样本，提取总DNA。以此为模板，PCR分段扩增出SVBV-SY和SVBV-BJ片段，拼接获得全长基因组克隆pSVBV-SY和pSVBV-BJ。SVBV-SY基因组序列全长7864bp，序列登录号为KP311681。SVBV-BJ基因组序列全长7863bp，序列登录号为KR080547。比对基因组全序列发现，SVBV-SY与SVBV-BJ全长基因组序列相似