猪瘟口服疫苗保护剂筛选及免疫效果评价

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1、学校代码：10264研究生学号：M120104120上海海洋大学硕士学位论文题目：猪瘟口服疫苗保护剂筛选及免疫效果评价英文题目：ScreeningandevaluationoftheprotectiveadditivesfororalimmunizationofCSFvaccine专业：临床兽医学研究方向：动物病毒学姓名：李星指导教师：刘惠莉二O一五年四月二十日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用

2、的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属

3、于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单备姓名工作单位职称注上海海洋大学水产与教授李家乐生命学院研究员张德福上海农科院畜牧所易建中上海农科院畜牧所研究员俞菊生上海农科院信息所研究员上海农科院华漕院区2015年6答辩地点答辩日期机关大楼二楼会议室月5日I上海海洋大学硕士学位论文猪瘟口服疫苗保护剂筛选及免疫效果评价摘要猪瘟(classicalswinefever,CSF)是由猪瘟病毒(Classicalswinefevervirus,CSF

4、V)引起的一种猪的高度接触性传染病。该病呈急性或慢性感染，在许多国家和地区均有发生，给养猪业造成极大的危害。目前，疫苗接种仍是控制猪瘟疫情的主要手段。现阶段我国使用的猪瘟疫苗主要有猪瘟兔化弱毒株、家兔脾淋组织苗、乳猪肾细胞苗等注射型疫苗。国外报道猪瘟疫苗口服免疫获得了很好的效果，经口服免疫，可减少对猪只的应激且省时省力。因此研究拟通过筛选理想的保护剂，制备可经口服途径免疫的猪瘟疫苗。本研究采用两种方法制备口服抗原：以猪瘟病毒疫苗株与重组LTRG蛋白及冻干保护剂配伍，制备冻干抗原；另外利用壳聚糖-海藻酸钠包埋重组CSFVE2蛋白

5、，制备微囊抗原；两种抗原分别口服饲喂小鼠，以细胞免疫指标和体液免疫指标评价抗原的免疫效果，筛选理想的抗原保护剂。1蛋白抗原包埋及免疫活性检测构建CSFVE2基因的原核表达质粒并表达蛋白，经纯化后将其作为抗原，与黏膜佐剂蛋白LTRG共同包埋制备壳聚糖-海藻酸钠微球，然后口服免疫小鼠，检测其免疫效果。结果，包埋E2和LTRG蛋白组小鼠的血清IgG和黏膜IgA水平均显著高于对照组，高于E2蛋白包埋组，表明LTRG蛋白作为一种黏膜佐剂，增强了小鼠的免疫反应。此外，包埋E2和LTRG蛋白组小鼠的抗体水平显著高于E2+LTRG蛋白组，说明

6、壳聚糖-海藻酸钠微球作为包埋载体，将抗原进行了有效的呈递，从而诱导小鼠产生免疫反应。2冻干保护剂筛选及免疫效果评价研究配比了不同组分的冻干保护剂，包括明胶、乳糖和甘氨酸，与黏膜佐剂LTRG蛋白、CSFV按比例混合，经优化冻干工艺后，制备了4种CSFV的冻干苗。口服免疫小鼠，测定血清IgG和黏膜IgA抗体效价。结果，含明胶和甘氨酸的试验2组和含明胶的试验4组经冻干后外观形态较好，水溶后呈现澄清状态；试验2组和试验4组的冻干苗经口服免疫，诱导小鼠产生的IgG抗体水平极显著I上海海洋大学硕士学位论文高于CSFV组、CSFV+LT组及

7、其他试验组；二免7天后试验2组小鼠产生的IgA抗体极显著高于其他组。而且，试验2组小鼠脾脏的IFN-γ和IL-4细胞因子的表达量也极显著高于其他组。表明，在冻干过程中，明胶和甘氨酸对猪瘟病毒起到了良好的保护作用，提高了猪瘟病毒疫苗经口服途径的免疫效果。利用壳聚糖-海藻酸钠包埋制备重组蛋白微球抗原，能诱导机体产生良好的体液免疫反应和细胞免疫应答，证实包埋蛋白抗原具有良好的免疫效果。配伍不同组分的猪瘟病毒疫苗保护剂，制备的冻干疫苗，能有效提高机体免疫抗体水平，证实制备的冻干保护剂配方对猪瘟病毒有较好保护作用。本研究为猪瘟疫苗冻干保

8、护剂筛选和不同剂型疫苗的开发奠定了基础。关键词：猪瘟疫苗，口服免疫，微球包埋抗原，LTRG蛋白，冻干保护剂II上海海洋大学硕士学位论文ScreeningandevaluationoftheprotectiveadditivesfororalimmunizationofCSFv