猪瘟活疫苗佐剂的制备及其增强疫苗免疫效果评价

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1、分类号学号M201271581学校代码10487密级硕士学位论文猪瘟活疫苗佐剂的制备及其增强疫苗免疫效果评价学位申请人：梁孔贤学科专业：生化与分子生物学指导教师：刘卫教授答辩日期：2015年5月20日AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceStudyonPreparationandEvaluationImmunityEffectofAdjuvantforLiveVaccineAgainstClassicalSwineFeverCandidate:LiangKongxia

2、nMajor:BiochemistryandMolecularBiologySupervisor:Prof.LiuWeiHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan430074,P.R.ChinaMay,2015独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论

3、文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日华中科技大学硕士学位论文摘要猪瘟是严重危害养猪业的一种病毒性传染病，注射猪瘟疫苗是预防猪瘟的重要方法。目前常用的猪瘟疫苗佐剂副作用较强，安全性和增强免疫效果有待提高，同时，还存在黏度高，注射使用不方

4、便等问题。本文针对新发展的猪瘟活疫苗，研制安全性好、能够有效增强免疫效果、使用方便的猪瘟活疫苗新型佐剂，并对O/W乳剂型猪瘟活疫苗佐剂的安全性和增强免疫效果进行评价。对W/O/W乳剂型疫苗佐剂和聚合物凝胶佐剂的处方和制备工艺进行了初步研究。开展的主要研究工作如下：（1）采用高压均质技术制备了O/W乳剂型猪瘟活疫苗佐剂，采用响应面实验设计优化了猪瘟活疫苗佐剂的处方和制备工艺，并对其稳定性、粒径、多分散指数（PDI）及Zeta电位进行表征。优化处方和工艺制备的O/W型疫苗佐剂平均粒径为100.4nm，PDI为0.147，Zeta电位为-28.7mV，离心稳定性实验表明其稳定性良好。（2）进行了O

5、/W乳剂型猪瘟活疫苗佐剂小鼠安全性实验。结果表明，注射佐剂组小鼠体重和生存状态与空白对照组相比较没有差异，没有出现由佐剂引起的死亡或者明显的局部和全身不良反应。两周后解剖小鼠，检查发现其注射部位及心、肝、脾、肺、肾均正常，没有中毒症状。表明研制的O/W型猪瘟活疫苗佐剂安全性良好。（3）将O/W乳剂型疫苗佐剂与猪瘟疫苗混合后，肌肉注射免疫小鼠，进行佐剂增强免疫效果评价。实验结果表明，佐剂组小鼠血清中抗猪瘟（CSFV）抗体水平与对照组有显著差异，抗体水平能够持续较长的时间，表明O/W乳剂型猪瘟活疫苗佐剂能够有效诱导机体产生体液免疫应答；佐剂组小鼠血清中IL-4、IL-6和IFN-γ的水平均有明显

6、提高，表明该疫苗佐剂能够诱导机体产生细胞免疫应答。（4）采用高速分散结合高压匀质技术制备W/O/W乳剂型疫苗佐剂，对其处方和制备工艺进行了研究，通过筛选确定了乳化性能好的复合乳化剂和高压匀质制备工艺条件，优化制备的W/O/W乳剂型疫苗佐剂稳定性好，黏度适中。（5）开展了聚合物凝胶佐剂的处方和制备工艺研究，对聚合物凝胶基质、乳化剂、油相以及高压匀质工艺进行了筛选和优化，优化处方和工艺制备的聚合物凝胶佐剂平均粒径为221.6nm，PDI为0.114，Zeta电位为-29.7mV，稳定性良好。I华中科技大学硕士学位论文关键词：猪瘟活疫苗；O/W乳剂型佐剂；W/O/W乳剂型佐剂；聚合物凝胶佐剂；安全

7、性；增强免疫效果II华中科技大学硕士学位论文AbstractClassicalswinefever(CSF)isanoftenfatalandhighlycontagiousviraldiseaseofdomesticpigs,whichmayresultindevastatingfinanciallosses.VaccineinjectionisanimportantmethodtopreventCSF.T