rictor在肾癌转移中的功能研究及分子机制探讨

《rictor在肾癌转移中的功能研究及分子机制探讨》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R73-37学校代代码：10062密级：学号：2011601091博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：Rictor在肾癌转移中的功能研究及分子机制探讨TITLETheFunctionalandMechanismInvestigationofRictorinRenalCellCancerMetastasis一级学科：临床医学二级学科：肿瘤学论文作者：孙博指导教师：张宁教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R73-37学校代代码：10062密级：学号：2011601091学位类别：科学学位专业学位学科门类：医

2、学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：Rictor在肾癌转移中的功能研究及分子机制探讨TITLETheFunctionalandMechanismInvestigationofRictorinRenalCellCancerMetastasis一级学科：临床医学二级学科：肿瘤学论文作者：孙博指导教师：张宁教授导师组成员：郭华副研究员天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个

3、人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学博士学

4、位论文中文摘要研究背景和目的：肾细胞癌是肾组织肿瘤中最常见的一种肿瘤，其中50%以上的肾癌患者死于肿瘤转移。因此，为了准确判断预后及对病人实行个体化治疗，进一步了解肿瘤转移的生物学机制及筛选肿瘤转移的相关生物标记物成了当务之急。近年来，越来越多的研究显示肿瘤微环境中的细胞因子，尤其是肿瘤坏死因子会增强肾癌的运动能力，进而增加肾癌的转移。然而，其调节肿瘤细胞转移的机制尚不明确。Rictor是组成mTORC2的关键分子，其功能涉及到调节细胞骨架重构、细胞迁移、细胞存活和增殖等方面上。我们课题组之前的研究表明mTORC2中的Rictor在乳腺癌组织中高表

5、达，并与患者淋巴结转移的出现密切相关，降低肿瘤细胞中Rictor的表达可以明显抑制肿瘤细胞的运动和转移。但是目前有关mTORC2/Rictor的功能研究还处于初步探讨阶段，尤其在肾癌运动转移方面的研究更为有限。本研究第一部分主要通过体内外实验探讨Rictor在肾癌转移的功能作用。本研究第二部分则运用细胞生物学和分子生物学实验方法，研究促炎因子TNF处理对肾癌细胞运动能力的影响，以及Rictor在该过程中的功能及其分子机制，以明确Rictor在TNF促进肿瘤细胞运动这一现象中的作用。希望本研究能深化人们对肿瘤转移分子机制的认识，力求能为临床提早发现

6、和治疗肿瘤转移提供新的思路、观点和依据。研究方法：1)应用慢病毒包装系统感染人肾癌细胞系ACHN，利用WesternBlotting和实时定量PCR技术检测Rictor降表达效率。2)利用划痕实验、趋化实验以及侵袭实验观察稳定降表达Rictor细胞的运动能力的变化。3)利用严重联合免疫缺陷小鼠建立肿瘤移植瘤转移模型，根据小鼠肝、肺组织HE染色结果研究下调Rictor的表达对肾癌细胞转移能力的影响，并通过计算原发瘤体积初步评估下调Rictor的表达对肾癌细胞增殖能力的影响。4)应用划痕实验、趋化实验和侵袭实验观察TNF处理后ACHN细胞运动能I天津医

7、科大学博士学位论文力的改变，以及降表达Rictor对TNF处理后ACHN细胞运动能力的影响。5)应用WesternBlotting和实时定量技术检测TNF处理后ACHN细胞内Rictor的表达情况。6)应用WesternBlotting和免疫荧光技术分别检测TNF处理后ACHN细胞内IB的含量和磷酸化的变化，以及p65细胞内转位的情况。7)应用萤光素酶报告基因检测系统和染色体免疫共沉淀技术分析RICTOR启动位点上游序列，以探究RICTOR的转录调控机制。结果：1)慢病毒感染后，ACHN细胞内Rictor表达量明显下调。2)稳定降表达Ric

8、tor的ACHN细胞相比空白组和对照组运动能力明显减弱。3)稳定降表达Rictor的ACHN细胞在小鼠肺和肝