猪流行性腹泻病毒（pedv）流行株的序列分析和抗原表位表达

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1、学校代码：学号：分类号：密级：’总硕士学位论文题猪流行性腹担病流行■序列分析和抗原表愈直怒程小鄉指导教师时间二〇一五年五月Thesequencesanalysisandepitopeexpressionofporcineepidemicdiarrheavirus(PEDV)epidemicstrainsAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinAgonomyByChengXiao-naSupervisor:YangYu-huiMa

2、jor:WildlifeConservationandUtilizationSubmitedtime:May,2015海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果对本文的研究做出重要贡献的个人和氣体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担《论文作者签名：曰期年‘月曰学位论文艇权使用授权说明本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即

3、：学校有杈保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版’允许论文被查阖和借阅。学校可以为存在馆际合作关系兄弟高校用户提供文献传递脤务和务。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名导师签名日期曰期：月日本人已经认真阅读：“高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交高校学位论文：全文据库”中全文发布’并可按《章程”中规定享受相关权益。同意论文提交后滞后：口半年二年：口二年发布，论文作者签

4、名：导师签名：曰期：月曰日期：年《月曰摘要猪流行性腹泻（是以水样腹泻、脱水和呕吐为临床症状的一种高接触性急性肠道传染病，病原为猪流行性腹泻病毒（。猪流行性腹泻病毒和传染性胃肠炎病毒（同属冠状病毒科冠状病毒属（的成员。可以诱使各种年龄段的猪发病，其中受它侵害最严重的是哺乳仔猪，可造成乳猪高达的发病率和死亡率。自年在我国暴发以来，该病已然成为世界流行性的疾病，是造成我国各地养殖场仔猪死亡的主要疫病之一，严重地危害养殖业的发展和养殖户的经济利益。因此，每年对的流行病学监测和免疫预防是一项必不可少的任务，特别是通过分子生物学手段对的分子流

5、行病学特征进行监测，可使我们了解毒株的来源和变异程度及毒株之间的亲缘关系，从而为该病的防控提供理论依据。针对于此，本论文进行了如下内容的研究：利用和分子克隆等分子生物学技术对地方流行毒株—进行了全基因测序，并使用和软件将该序列与来自我国、美国、韩国、加拿大等国的株参考毒株进行比较分析，确定了各个毒株之间的亲缘关系，并绘制了系统发育树。结果表明：该毒株长与疫苗株、、的同源性分别为、、发育树分为个进化分支，即和型。主要为疫苗株，包含大多数流行毒株，包括中国年不同省份旳毒株以及美国、韩国、加拿大等国的流行毒株，这说明群是全球目前主要的优

6、势流行毒株。从单个基因的发育树分析可知，相较于易于变异的基因，—基因、五基因、因、因的序列较为保守。对年来自个省市地区的株地方流行毒株的基因，进行了克隆测序，并使用生物软件将这些序列与来自我国、美国、韩国、日本等国的株参考毒株进行比较分析，确定了各个毒株之间的亲缘关系，并绘制了系统发育树。结果表明：株流行株与株参考毒株基因的发育树分为个进化分支，即和型。主要为疫苗株，包含大多数流行毒株，是全球目前主要的优势流行毒株，其中国内流行毒株缺乏地区性。为了在基因上筛选出反应原性较好的片段，利用生物学软件对基因进行了抗原位点分析，将基因中三

7、段不同抗原位点通过融合技术连接在一起进行原核表达，然后进行检测。结果表明，最后获得的融合蛋白具有免疫活性，说明所选的三个片段中存在具有免疫原性的片段，至于几个片段具有抗原性，还需进一步实验验证。关键词：猪流行性腹泻病毒；分子流行病学调查；全基因；基因；原核表达AbstractPorcineepidemicdiarrhea(PED)isanacuteinfectiousdiseasewithseverediarrhea,vomitinganddehydrationclinicalfeaturescausedbyporcineepid

8、emicdiarrheavirus(PEDV).Porcineepidemicdiarrheavirusand(TGEV)belongtothecoronavirusfamilyofthegenusCoronavirus.Pigsofvarious